青天葵总DNA提取及随机扩增多态性DNA反应条件建立.docVIP

青天葵总DNA提取及随机扩增多态性DNA反应条件建立 　【摘要】 　　目的建立并优化青天葵样品总DNA提取方法及随机扩增多态性DNA（RAPD）反应。方法采用改进的高盐低pH法提取青天葵鲜叶和药材样品，通过正交设计和均匀设计，改变反应体系和扩增程序优化随机扩增多态性DNA。结果使用高盐低pH值法可较好地提取新鲜叶片的DNA，药材叶片含杂质较多，但都能用于RAPD。反应体系为：缓冲液2.0 μ1，0.5 μl dNTP（各2.5 mmol·L-1），0.8 μl Mg2+（25 mmol·L-1），0.5 μl引物（20 pmol·μl-1）, 0.2 μl Taq酶（5U·μ1-1），1 μl DNA（50 ng），1μl BSA（20 mg·ml-1），加双倍蒸馏水至20 μl。扩增程序为：94 ℃预变性3 min；94 ℃变性30 s，40 ℃退火30 s，72 ℃延伸60 s，40个循环；72℃延伸5 min。结论建立并优化了的青天葵样品总DNA提取方法及RAPD反应体系。 【关键词】 青天葵 DNA提取 随机扩增多态性DNA 正交设计 均匀设计 　　Abstract：ObjectiveTo establish and optimize the methods of total DNA extraction and RAPD analysis of Nervilia for