香菇C91-3 cDNA文库构建及鉴定.docVIP

香菇C91-3 cDNA文库构建及鉴定 　 作者：王晓丽，钟民涛，李星云，曹婧，宁安红，黄敏 【摘要】 目的构建香菇C91-3 cDNA文库。方法低速离心法收集香菇C91-3菌丝体发酵液中的菌丝，提取总RNA，巢式PCR扩增5SrRNA非转录间隔区2片段并测序鉴定。纯化mRNA，以mRNA为模板进行反转录反应；产物与pBlueScript II SK（+）载体连接，并转化E.coil DH10B，检测库容及插入片段。结果香菇C91-3cDNA文库初始库容为7.2×106cfu，插入片段长度0.4～3.4kb，平均1.5kb。结论成功构建香菇C91-3 cDNA文库，适合用于研究香菇蛋白的编码基因。 【关键词】 香菇； cDNA文库； 5SrRNA非转录间隔区2； 距离树； 库容 香菇作为一种常用的药用真菌在预防、治疗恶性肿瘤方面都具有重要价值，其多糖提取物主要为β-1,3键连接主链和β-1,6键连接支链的葡聚糖，能够提高机体免疫功能，间接抑制肿瘤的生长［1，2］，具有突出防癌抗癌、提高免疫力及缓解化疗反应等作用［3，4］，现已正式被作为辅助化疗药物应用于临床，香菇也被我国列为抗癌资源植物［5］。 　　 　　香菇的生长周期为2～3个月，而生物发酵法培养7～10 d即可收获，大大缩到了试验周期，并且发酵液中的多糖及氨基酸成分与报道中香菇子实体的分析结果一致。因此，多年来本课题组一直