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马鞭草抗乙肝有效部位化学成分探究 　 作者：陈丽花,李志军,王定勇 【摘要】 　　目的 研究马鞭草( Verbena officinalis L.)抗乙肝有效部位的化学成分。方法 采用柱层析和薄层层析分离马鞭草有效部位中的化学成分;用IR、ESIMS、1HNMR、13CNMR等波谱技术鉴定结构。结果 分离并鉴定了6个化合物，分别为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)。结论 首次报道马鞭草抗乙肝有效部位的化学成分;化合物3、6为首次从该植物中分离得到。 【关键词】 马鞭草 杨梅素 抗乙肝作用 　Abstract:Objective To study the chemical constituents in the antiHBV active fraction of Verbena officinalis. Methods The constituents were separated and purified by column chromatography and thin layer chromatography,and their structures were elucidated by IR,MS,1HNMR and 13CNMR. Results Six compounds were isolated from the effective fraction of Verbena officinalis: kaempferol (1),quercetin (2),myricetin (3),ursolic acid (4),verbenalin (5) and myricetrin (6). Conclusions Chemical constituents in the antiHBV active fraction of Verbena officinalis were first reported. Compounds 3 and 6 were obtained from this plant for the first time. 　　Key words:Verbena officinalis; chemical constituents; myricetin; antihepatitis B virus 　　 马鞭草(Verbena officinalis L.)为马鞭草科(Verbenaceae)多年生草本植物，始载于《名医别录》，民间以其全草或带根全草入药。马鞭草作为传统中药，具有清热解毒、消肿利尿、活血通经等功效，广泛用于治疗伤风感冒、水肿、痢疾、黄疸等证[1]。现代研究表明，马鞭草能抑制乙型肝炎病毒(HBV)和HBsAg，并能抗乙肝纤维化[2-3]。利用酶联免疫吸附检测(ELISA)技术[4]，作者筛选到马鞭草抗乙肝活性的有效部位。为阐明其药效物质基础，本文对该有效部位进行系统的化学成分研究，从中分离得到6个化合物，分别鉴定为山柰酚(1)、槲皮素(2)、杨梅素(3)、熊果酸(4)、马鞭草苷(5)和杨梅苷(6)，其中化合物3和6为首次从该植物中分离得到。 　　1 仪器与材料 　　熔点用XRC1显微熔点仪(四川大学科仪厂制造)测定,温度计未校正;红外光谱用 Nicolet PROTG460 光谱仪测定,溴化钾压片;核磁共振用Bruker AM500 型核磁共振仪测定,TMS为内标;ESIMS 在 HP1100 LC/ MS上测定。柱色谱用硅胶(200～300目)、薄层色谱用硅胶(10～40 μm)均为青岛海洋化工厂生产，Sephadex LH20为美国GE公司产品，ODS为日本YMC产品。马鞭草于2008年8月采自广东省广州市，由广东药学院中药学院曾令杰博士鉴定为马鞭草(Verbena officinalis L.)。 　　2 提取与分离 　　取阴干的马鞭草10 kg，粉碎至约60目，用适量甲醇室温浸泡3次,每次7 d,合并提取液,抽滤,减压回收甲醇得墨绿色黏膏状提取物280 g。取该提取物250 g分散于适量热水中再转移至2 500 mL分液漏斗,依次用石油醚、CHCl3萃取3次(每次用1 000 mL溶剂)，除掉极性小的化学成分,再用EtOAc萃取3次(每次用1 000 mL),减压浓缩乙酸乙酯萃取液后得到乙酸乙酯萃取物35 g。ELISA法检测结果表明乙酸乙酯萃取物为马鞭草抗乙肝活性有效部位[4]。有效部位经硅胶柱层析(200～300目)，三氯甲烷甲醇系统(体积比20∶1～0∶1) 梯度洗脱。TLC检测，合并相同组分，共得到7个部分;各部分再经Sephadex LH20柱层析[洗脱剂为甲醇水(体积比3∶2)]、O