PTPN22基因多态性及自身免疫甲状腺病相关性.docVIP

PTPN22基因多态性及自身免疫甲状腺病相关性 　【摘要】 目的: 检测PTPN22基因的单核苷酸多态性（SNP）及其与中国人自身免疫甲状腺病（AITD）的相关性, 并研究CTLA4基因SNP与PTPN22 SNP的相互关系。方法: 采用PCRRFLP技术分析231例AITD患者, 其中Graves病（GD）149例, 桥本甲状腺炎（HT）82例和131例健康对照者PTPN22基因+1858 Cgt;T及CTLA4基因49Agt;G位点的基因型。采用SASPPCR技术分析PTPN22基因启动子-1123Ggt;C的基因型。结果: （1）PTPN22基因的+1858Cgt;T位点不存在多态性; （2）PTPN22基因-1123Ggt;C SNP的等位基因和基因型分布频率在GD组与正常对照组间的差异有统计学意义（P值分别为0.040和0.013, OR值分别为1.44和2.33）; （3） CTLA4基因 49Agt;G位点的等位基因和基因型分布频率在AITD组与正常组间有明显差异; （4）与携带PTPN22的G等位基因及CTLA4的AA基因型者相比, 携带PTPN22CC基因型与CTLA4 AG或GG基因型者发生GD的OR值=3.31（95%CI: 2.69-8.89）。结论: PTPN22基因启动子-1123Ggt;C SNP与GD的发生相关, 其CC基因型与CTLA4基因的G 等位基因对GD的发生起协同作用。 【关键词】 蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因 自身免疫性甲状腺病 单核苷酸多态性 　　自身免疫性甲状腺病（autoimmune thyroid disease, AITD）是一组以甲状腺为靶器官的自身免疫性疾病, 包括Graves病（Graves disease, GD）、桥本甲状腺炎（Hashimotos thyroiditis, HT）及产后甲状腺炎等。遗传因素在AITD的发病中起重要作用, 目前比较肯定的AITD易感基因有人类白细胞抗原基因（human leucocyte antigen, HLA）和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（cytoxic T lymphocytoassociated antigen4, CTLA4）基因。蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)基因编码淋巴特异性酪氨酸磷酸酶（Lyp）, Lyp是一种细胞内的酪氨酸磷酸酶, 通过其富含脯氨酸的基序（称为P1）与Csk激酶（C末端Src酪氨酸激酶）的SH3结构域相结合, 二者的作用使与T细胞受体（TCR）信号转导有关的激酶如Lck、 Fyn和ZAP70去磷酸化, 发挥抑制T细胞活化的作用［1］。多个大型、 独立的研究重复了PTPN22基因620密码子的1858C/T SNP与1型糖尿病(T1D)［2］、 类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）［3］、 AITD［4］、 系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus, SLE）［5］等有相关性, 然而对日本人群RA［6］、 T1D［7］以及GD［8］的大样本相关性分析并未发现PTPN22的1858T SNP。为此, 我们选择了与高加索人AITD的发生有相关性的外显子14+1858 SNP以及与日本人T1D的发生相关的启动子-1123 SNP为研究内容, 观察中国北方汉族人群上述位点是否存在多态性以及与AITD的相关性, 并分析CTLA4基因多态性与PTPN22的关系, 探讨AITD的遗传背景。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 病例组为在西安交通大学第一附属医院内分泌专科门诊收集的231例AITD患者, 平均年龄（36.7±14.2）岁, 其中GD 149（男40, 女109）例; HT 82（男21, 女61）例。GD和HT的诊断依据为典型的临床表现结合实验室检查。从我院查体中心按AITD患者的年龄分布、 性别构成随机选取131例健康人为对照, 其中男39例, 女92例, 年龄（34.5±13.3）岁。离心柱型血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒与PCR扩增试剂盒2 Taq PCR Masterix均购自北京天为时代公司; 限制性内切酶Rsa I购自纽英伦生物技术有限公司; Bbv I购自宝生生物工程有限公司。引物由北京奥科生物技术有限责任公司合成。 　　1.2 方法 　　1.2.1 外周血基因组DNA的提取 清晨空腹静脉血EDTA抗凝, 采用离心柱型血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA, 按说明书操作。 　　1.2.2 PCR扩增反应 （1）PCR扩增PTPN22基因外显子14: 根据GenBank中的PTPN22基因序列自行设计引