刺五加苷对D半乳糖致衰老模型大鼠免疫功能影响.docVIP

刺五加苷对D半乳糖致衰老模型大鼠免疫功能影响 　【摘要】 目的 研究刺五加苷对D半乳糖(Dgal)致衰老模型大鼠免疫功能的影响。方法 以不同浓度刺五加苷作用Dgal致衰老模型大鼠后，计算脏器指数，MTT比色法测定T淋巴细胞增殖功能，ELISA法测定白介素2（IL2）、白介素6(IL6)、肿瘤坏死因子α（TNFα）浓度。结果 刺五加苷改善Dgal致衰老大鼠免疫功能具有浓度依赖性。结论 刺五加苷能改善衰老大鼠免疫功能，延缓免疫衰老。 【关键词】 刺五加苷；衰老；白介素2；白介素6；肿瘤坏死因子α 免疫功能下降已成为机体衰老的特征表现之一，引起衰老的因素都会导致免疫系统功能下降，从而发生感染、癌症及自身免疫性疾病等，使正常寿命明显缩短。刺五加药性温和，自古就被视为具有抗衰老作用的良药，汉代《神农本草经》已将它列为无毒、久服可以轻身、延年益寿而无害的上品，苷类是五加属植物的有效生物活性成分。虽然现代研究证实，刺五加提取物能调节免疫功能〔1〕，纠正自由基代谢紊乱，抗动脉硬化〔2〕、抗疲劳〔3〕，提高机体对有害剌激的抵抗能力等作用，但未见刺五加苷（CG）对免疫衰老影响方面的报道。本实验通过建立D半乳糖(Dgal)致衰老大鼠模型，研究CG延缓衰老的作用，并从免疫学角度探究其延缓衰老的机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　CG由湖南九汇现代中药有限公司生产，Dgal由Sigma公司生产，噻唑蓝（MTT）和二甲基亚砜（DMSO）由上海生工生物工程有限公司生产，白介素2(IL2)、IL6、肿瘤坏死因子α(TNFα)检测试剂盒购于北京晶美生物技术有限公司，其他试剂为国产分析纯。 　　1.2 仪器 　　DS671型天平（上海寺冈电子有限公司）；紫外分光光度仪：Beckman640型；高速式离心机（上海医学仪器厂TGL16G型）；恒温水浴箱（上海天平仪器厂HWC52型）；电子天平（上海第二天平仪器厂MA型）；XW90型振荡混合器（上海医科大学仪器厂）；酶联测定仪（美国Biotec公司ELX800型）。 　　1.3 方法 　　1.3.1 衰老造模的建立 　　采用清洁级SD大鼠40只（实验中死亡1只）体重为200～300 g，鼠龄3～4个月，雌雄各半，饮用清洁水，标准饲料喂养，腹腔注射Dgal生理盐水100 mg·kg-1·d-1，连续给药56 d。开始注射2 w后，将大鼠随机分为5组，除中浓度组7只外，各组8只，每日按照10 ml/kg灌胃。①对照组：注射生理盐水，生理盐水灌胃；②模型组：注射Dgal，生理盐水灌胃；③低浓度组：注射Dgal，3.6 g·kg-1·d-1CG灌胃；④中浓度组：注射Dgal，7.2 g·kg-1·d-1CG灌胃；⑤高浓度组：注射Dgal，14.4 g·kg-1·d-1CG灌胃。末次灌胃给药后24 h，处死动物，测定各项指标。 　　1.3.2 脏器指数的计算 　　脏器指数(g/100 g)=脏器重量(g)×100/大鼠体重(g)。 　　1.3.3 T淋巴细胞增殖功能的测定 　　采用MTT比色法测定。 　　1.3.4 血清IL2、IL6、TNFα浓度的测定 　　　采用ELISA法。 　　1.4 统计学处理 　　采用SPSS13.0统计软件，数据以x±s表示，进行单因素方差分析。 　　2 结 果 　　2.1 CG对衰老大鼠脏器指数的影响 　　与对照组相比，模型组胸腺指数存在非常显著意义(P＜0.01)；与模型组相比，中、高浓度组胸腺指数存在显著意义(P＜0.05)；不同浓度组间比较，低、高浓度组胸腺指数存在非常显著意义(P＜0.01)，中、高浓度组胸腺指数存在显著意义(P＜0.05)；各组大鼠脾指数间不存在显著意义(P＞0.05)，见表1。表1 各组大鼠免疫器官指数的比较(略) 　　2.2 CG对大鼠T淋巴细胞增殖功能的影响 　　对照组光密度值（OD值）为0.192±0.004，模型组OD值为0.134±0.003，低浓度组OD值为0.138±0.003，中浓度组OD值为0.143±0.003，高浓度组OD值为0.151±0.007。与对照组相比，模型组T淋巴细胞增殖功能浓度比较有非常显著差异(P＜0.01)；与模型组相比，低CG浓度组有显著差异(P＜0.05)；不同浓度组间比较，高、中浓度组之间作用有非常显著差异(P＜0.01)。 　　2.3 CG对衰老大鼠血清IL2、IL6、TNFα浓度的影响 　　与对照组相比，模型组IL2、IL6、TNFα浓度具有非常显著意义(P＜0.01)；与模型组相比，高浓度组IL2、IL6、TNFα浓度具有非常显著意义(P＜0.01)，中浓度组IL2、TNFα浓度具有非常显著意义(P＜0.01)，IL