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参贞合剂对S180荷瘤小鼠T细胞免疫功能影响 　【摘要】 　　目的 研究参贞（人参、黄芪、女贞子）合剂对S180荷瘤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法 小鼠胃饲参贞合剂，流式细胞术检测荷瘤小鼠T细胞亚群变化，MTT法检测荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖能力，ELISA法检测IL2诱生量。结果 胃饲参贞合剂使荷瘤小鼠的T淋巴细胞亚群、增殖能力和IL2产生量均有明显提高(P＜0.05)。结论 参贞合剂对荷瘤小鼠免疫功能有正向调节作用，将其研制成提高肿瘤患者免疫功能的药物具有良好的前景。 【关键词】 参贞合剂；荷瘤小鼠；免疫调节 　　参贞合剂由中药人参、黄芪、女贞子三味中药组成，研究表明人参、黄芪与女贞子均可提高机体的免疫功能，并具有抗肿瘤作用〔1，2〕。为探讨上述3种药合用对荷瘤小鼠免疫功能的影响，笔者观察了参贞合剂对荷瘤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用，为进一步开发利用参贞合剂提供实验基础，也为中药治疗肿瘤的临床应用提供新的思路。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　刀豆蛋白A（ConA,Sigma公司)、IMDM培养基(GiBco公司)、标准胎牛血清（中国医学科学院灏洋生物)、淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司)、噻唑蓝(MTT，AMRESCO公司)、ELISA试剂盒（R＆D公司）、单克隆抗体 CD3,CD4，CD8 试剂盒(华美生物公司)。参贞合剂由本实验室配制。实验动物为昆明种雄性小鼠，体重18～20 g，购自长春高新医学动物实验研究中心。 　　1.2 方法 　　小鼠随机分成2组，每组10只。腹腔接种S180瘤细胞，于接种同时参贞合剂组以参贞合剂胃饲（按53 g/kg），生理盐水组胃饲等量生理盐水。连续胃饲10 d后取材。 　　1.2.1 T淋巴细胞亚群的测定 　　流式细胞术检测荷瘤鼠脾脏CD3+T、CD4+T、CD8+T细数量、CD4/CD8比值，将小鼠颈椎脱臼处死,常规制备脾细胞悬液；TrisNH4Cl溶胀红细胞，计数，取106个细胞(200 μl体积)，加入荧光标记CD3、CD4、CD8抗体，避光冰浴45 min，冷PBS洗涤2次后，用流式细胞仪检测脾脏CD3+T、CD4+T、CD8+T细胞数量。 　　1.2.2 T淋巴细胞增殖能力的测定 　　依文献〔3，4〕方法：服用参贞合剂组小鼠于停药后次日，与生理盐水对照组小鼠同时眼球放血处死，无菌取脾脏，制备脾脏细胞悬液，以完全IMDM培养液稀释。镜下计数脾细胞，调脾细胞浓度至5×106/ml。取0.1%台盼蓝溶液1滴加4滴细胞悬液，观察活细胞数gt;95％。将不同组别的脾细胞悬液置于96孔培养板中100 μg/孔，加入ConA 100 μg/孔，终浓度为5 μg/ml。置CO2培养箱孵育48 h，取出用倒置显微镜观察其细胞增殖情况。见有转化的大淋巴母细胞，即脾淋巴细胞已进入对数分裂期。每孔加入5 mg/ml MTT 10μl/孔，置CO2培养箱孵育6 h后取出，贴壁吸上清液100 μl弃之，加入DMSO 100 μl/孔，充分振荡后，静止10 min，酶标仪测定（570 nm）。 　　1.2.3 IL2分泌能力检测 　　无菌取脾细胞悬液，采用ELISA方法检测脾细胞上清IL2含量，具体方法参照说明书进行。 　　　1.3 统计学分析 　　采用SPSS11.0统计软件,实验数据均以x±s表示,定量资料采用t检验,并进行单因素方差分析及组间均数差异的统计学分析。 　　2 结 果 参贞合剂组荷瘤鼠CD3、CD4、CD4/CD8、T淋巴细胞及IL2水平明显较生理盐水组升高，差异均有统计学意义(均P＜0.05)。见表1。表1 参贞合剂对荷瘤鼠T细胞亚群、T细胞增殖能力和IL2水平的影响(略) 　　3 讨 论 目前临床应用的抗肿瘤化学合成药物虽然抗癌作用确切,疗效显著,但不良反应大,长期应用易产生耐药性。中医药治疗肿瘤已成为肿瘤治疗的主要疗法之一，并渐显其优越性。特别是一些中药的抑瘤作用和作为生物调节剂激活机体免疫细胞杀伤肿瘤作用的报道屡见不鲜，但其在抗肿瘤机制方面的研究还有待进一步探讨。 女贞子是木樨科植物女贞的干燥成熟果实,性味甘、微苦、凉,归肝、肾经,具有滋补肝肾、明目乌发等功能，有报道女贞子有养心安神之功，女贞子多糖对机体的造血系统与免疫功能有调节作用〔5〕，女贞子提取物对肿瘤细胞有一定的抑制作用〔6〕。人参具有大补元、益精生血之功效，对免疫功能亦有增强作用〔7，8〕，黄芪有补气升阳作用〔9〕。本研究结果证明，参贞合剂对荷瘤小鼠T细胞增殖能力和IL2产生量有上调作用。 机体免疫功能失常是肿瘤发生发展的重要因素，提高肿瘤病人的免疫机能是肿瘤免疫治疗的重要方面，本研究为黄芪、女贞子、人参合用提高肿瘤患者免疫功能提供了实验依据，提示该药物组合具有良好的应