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大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量高效液相色谱法测定 　 作者：陈夏静，姚汉玲，张秋琼，张秀桥，刘焱文 【摘要】 　　目的建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法。方法色谱条件：Angilent TC-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V），检测波长为290 nm。结果蛇葡萄素的回归方程为Y=24 061X+40.07（r=0.999 9，n=6），线性范围为0.101～1.101 μg；平均回收率为99.65%，RSD为1.49%。结论该方法简单、结果可靠，为大叶蛇葡萄药材的质量控制提供了快速准确的测定方法。 【关键词】 高效液相色谱法； 大叶蛇葡萄； 蛇葡萄素 　　Abstract：ObjectiveTo develop a method for determination of the content of Ampelopsin in A- mpelopsis megalophylla Diels et. Gilg by HPLC. Methods The separation was carried out on An- gilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm）with Acetonitrile-0.1%phosphoric acid solution(15:85) as mobile phase，and the detection wavelength was 290 nm. ResultsThe regression equation and coefficient was Y=24 061X+40.07(r=0.999 9，n=6) for Ampelopsin.The linear range was within the range of 0.101～1.101 μg.The average recovery and precision(RSD)of Ampelopsin were 99.65% and 1.49%, respectively. ConclusionThis met hod is simple,accurate and can be used for the quality control of Ampelopsin in Ampelopsis megalo- phylla Diels et. Gilg. 　　Key words： HPLC; Ampelopsis megalophylla; Ampelopsin 　　大叶蛇葡萄 Ampelopsis megalophylla Diels et. Gilg 是葡萄科蛇葡萄属的一种植物，是湖北恩施地区民间习用中草药，其性平，味酸、涩，具有清热利湿、活血化淤之功效，用于治疗痢疾、泄泻、小便淋痛、头昏目胀、高血压等病［1］。现代药理学研究表明，大叶蛇葡萄中的主要化学成分蛇葡萄素具有多种药理活性，如保肝护肝、抗肿瘤和降压等［2～4］。本实验室已对大叶蛇葡萄有效部位进行了指纹图谱研究［5］。为了更好地控制其质量，本文用高效液相色谱（HPLC）法对不同来源的大叶蛇葡萄中的蛇葡萄素进行了含量测定。 　　1 仪器与材料 　　Agilent-1100系列高效液相色谱仪(四元泵)；紫外检测器及配套色谱工作站；KQ-250B型超声超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AL204型万分之一电子分析天平（Mettler- Toledo Group）。对照品蛇葡萄素自制，从大叶蛇葡萄中提取分离得到，经UV、MS、H-NMR、IR光谱分析鉴定结构，并经HPLC面积归一化法检测，含量98.0％ ；大叶蛇葡萄(2009-02采自湖北恩施地区，并由本院生药教研室鉴定)。乙腈为色谱纯；水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件色谱柱：Angilent TC-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（15∶85，V/V）；流速：1 ml/mim；柱温：30℃；检测波长：290 nm；进样量：10 μl。 　　　2.2 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照品适量，加甲醇制成每毫升含蛇葡萄素0.101 mg的溶液，作为对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备精密称取样品（过60目筛）约0.1 g置锥形瓶中，甲醇25 ml，浸泡30 min,超声提取30 min，甲醇定容至30 ml，摇匀，过滤，精密吸取续滤液1 ml于25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 　　2.4 系统适用性实验取对照品溶液、供试品溶液于上述色谱条件下进样，得HPLC图（见图1）。结果在该色谱条件下，供试品在对照品色