大蒜素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及脑组织抗氧化能力影响.docVIP

大蒜素对阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力及脑组织抗氧化能力影响 　 作者：胡昔奇 李先辉 郑尧帆 龙颖 曹萍 张洁 【摘要】 目的 观察大蒜素对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力和脑组织抗氧化能力的影响。方法 采用 D半乳糖建立AD小鼠模型，大蒜素治疗组在造模的同时皮下注射大蒜素。通过行为学方法，观察大蒜素对AD小鼠记忆能力的影响;测定各组脑组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;常规HE和镀银改良法染色观察小鼠海马及皮质的形态学改变。结果 模型组与对照组、大蒜素治疗组比较，小鼠记忆功能明显减退,神经细胞破坏明显,海马和皮质出现β淀粉样蛋白沉积及老年斑;大蒜素治疗组和对照组的丙二醛(MDA)含量较模型组显著降低(Plt;0.05)，SOD活性明显高于模型组(Plt;0.05)。结论 大蒜素在清除自由基和抗氧化损伤方面有显著功效，可以有效改善AD小鼠空间学习记忆能力损害。 【关键词】 大蒜素; 阿尔茨海默病; 行为学;抗氧化能力 大蒜素是大蒜的主要成分，具有抗肿瘤、抗氧化、抗血小板聚集、提高免疫、清除自由基、护肝、降血脂、降血压及预防心血管疾病等生理学作用〔1〕。因其具有较好的脂溶性，可通过血脑屏障，因此在防治脑血管病方面的作用也备受关注。研究资料显示,大蒜素可改善血液流变性、增加脑血流量、清除自由基、改善脑功能及减轻急性脑梗死时缺血再灌注损伤〔2〕。大蒜素作为一种具有良好发展前景的天然抗氧化药物,具有抗氧化延缓衰老的作用〔3〕，同时对脑缺血再灌注大鼠海马神经元具有保护作用〔4〕,而氧化应激和海马神经元的损伤是阿尔茨海默病(AD)的主要发病机制。本研究采用D半乳糖致小鼠AD模型，从组织形态学角度,观察大蒜素对AD脑组织的保护作用及对小鼠学习记忆能力的改善作用，并对其抗氧化机制进行初步研究,为临床应用大蒜素防治AD提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 健康昆明雌性小鼠30只，清洁级，体重18～22 g，湖南长沙市开福区东创实验动物服务部提供，批准号：001847。 　　1.2 药品与试剂 大蒜素肠溶胶囊(20 mg/粒，湖北金龙福药业有限公司，批号，D半乳糖由国药集团化学试剂有限公司提供(批，兔抗P38 MAPK、SABC免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒由武汉博士德有限公司提供，考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、丙二醛(MDA)测定试剂盒及超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。 　　1.3 主要仪器 BX51 系统显微镜(Olympus)、微量进样器(上海安亭微量进样器厂)、UV3100PC型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)。 　　1.4 动物分组及造模 按照改良的Morris法对60只小鼠进行连续7 d Morris水迷宫定向航行训练〔5〕。每天分上下午2个时段，每个时段训练2次,并记录小鼠从放入水槽至找到平台的时间(逃避潜伏期)，若120 s仍找不到平台，则由实验者将小鼠放置于平台上，逃避潜伏期记为120 s，并让小鼠在平台上休息30 s。根据训练成绩，选择成绩较好的30只小鼠。按体重分层随机分成3组： AD模型组，大蒜素治疗组，阴性对照组。每组10只。AD模型组与大蒜素治疗组皮下注射12.5% D半乳糖40 μl，连续60 d。 　　1.5 给药方法 大蒜素治疗组在造模的同时按10 ml/kg进行腹腔注射大蒜素肠溶胶囊提取物0.48 g·kg-1·d-1;AD模型组和阴性对照组给予相同剂量的生理盐水，连续60 d。 　　1.6 水迷宫行为学检测 连续给药60 d后，对小鼠进行改良的Morris水迷宫法检测，记录小鼠的逃避潜伏期，评价各组大鼠记忆能力的改变。 　　1.7 抗氧化活性检测 行为学检测结束后，用25%的乌拉坦麻醉小鼠后固定于自制的手术板上，置于解剖盘中，开胸暴露并游离心脏。切开右心房，经左心室插入灌流4℃生理盐水20～30 ml，直至肝脏颜色转白及右心房流出液澄清后，继续灌注4%甲醛20～30 ml，取脑组织海马部组织块1 cm3 左右，4%甲醛浸泡固定24 h后，做石蜡组织切片。测定残余脑组织重量，按重量体积比加4℃生理盐水制成10%的组织匀浆，离心(2 500 r/min，10 min)，取上清液，置4℃备用。测定SOD 活力和MDA 含量。 　　1.8 组织形态的观察 分别采用HE染色和铃木神经组织镀银改良法〔6〕染色观察小鼠海马神经细胞及神经原纤维缠结(NET)。 　　1.9 统计学方法 数据用x±s表示，两个样本比较采用t检验，多个样本均数比较采用单因素方差分析,所有统计由SPSS17.0软件处理。 　　　2 结 果 　　2.1 大蒜素AD模型小鼠学习记忆能力的影响 改良的Morr