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川芎嗪对T淋巴细胞活化增殖影响 　 作者：张涛 赵蕊 柳朝阳 商宇 王茉琳 王小灵 【摘要】 目的 观察川芎嗪(LTZ)对大鼠T淋巴细胞活化增殖的影响。方法 将指数生长大鼠脾淋巴细胞与不同浓度的LTZ共培养，用MTT法观察LTZ对大鼠T淋巴细胞的增殖作用。无菌分离大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞，以0.25、0.5、1 mmol/L LTZ预培养60 min后，分别加入刀豆蛋白(ConA)继续培养48 h，以抗大鼠CD3和CD71单抗标记后，采用流式细胞术检测各组CD3+CD71+表达情况。结果 不同浓度LTZ呈浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖；ConA刺激可显著升高CD3+CD71+表达(均P＜0.01)，1、0.5 mmol/L LTZ可显著抑制ConA刺激下的CD3+CD71+表达(P＜0.01) 0.25 mmol/L作用逐渐减弱，呈一定的量效关系。结论 LTZ可抑制T淋巴细胞活化和增殖，其作用可能与下调T细胞转铁蛋白受体的表达，减少细胞对铁离子摄入有关。 【关键词】 川芎嗪；类风湿关节炎；T淋巴细胞；活化增殖 川芎嗪(LTZ)主要用于治疗多种心血管疾病〔1，2〕，对类风湿性关节炎(RA)的作用研究较少。本研究观察了LTZ对淋巴细胞活化增殖和T淋巴细胞表面CD71表达的影响,探讨LTZ治疗RA的机制。 1 材料与方法 1.1 药物和试剂 盐酸川芎嗪由北京第四制药厂生产，刀豆蛋白(ConA)、四甲基偶氮唑盐(MTT) 及其衍生物(XTT)均购自美国Sigma公司；环磷酰胺(cy) 为上海华联制药公司产品； RPMI 1640完全培养液、胎牛血清购自美国Gibco公司；单克隆抗体antiratCD3异硫氰酸荧光素(FITC)、antiratCD71藻红蛋白(PE)均购自Pharmingen公司，为上海华联制药公司产品。 1.2 动物 清洁级Wistar大鼠由哈尔滨医科大学实验动物中心提供。 1.3 试验方法 1.3.1 LTZ对T淋巴细胞的增殖作用〔3〕 取大鼠脾脏用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液配成5×106ml细胞悬液，将大鼠脾细胞悬液(终浓度2.5×106ml)点于96孔培养板上,每孔100 μl,再加入50 μl ConA及不同浓度LTZ药液，放入37℃、5%CO2孵箱中培养6 h,每孔加入XTT 20 μl,培养6 h,在酶标仪上以450 nm测各孔A值,结果以增殖率表示。 增殖率(% )= 实验孔A值对照孔A值对照孔A值×100%。 1.3.2 T细胞CD71的表达 大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞加ConA后分别培养20、24、48、72 h后，加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10 μL，避光放置30 min， PBS洗涤后，40 g/L多聚甲醛PBS固定,采用流式细胞仪检测CD3+CD71+表达情况。取24孔培养板,每孔加大鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞1 ml(终浓度1×109/L),先加不同浓度LTZ预培养60 min,PBS对照组加入相同容积的PBS；分别加入ConA (终浓度为10 mg/L)，37℃、体积分数5% CO2条件下培养48 h后加入antiratCD3FITC和antiratCD71PE各10 μl,避光放置30 min；PBS洗涤后，40 g/L多聚甲醛PBS固定，采用流式细胞仪检测各组CD3+CD71+表达情况。 1.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计软件，试验结果进行组间t检验。 　 2 结 果 2.1 LTZ对T淋巴细胞的增殖作用 LTZ在0.25～1 mmol/L浓度范围内可浓度依赖性地对ConA所诱导的T淋巴细胞增殖发生抑制作用，具有量效关系，见表1。 2.2 ConA及LTZ对CD3+T淋巴细胞表达CD71的影响 ConA刺激前CD3+T淋巴细胞CD71表达阳性率为（1.68±0.59)%，刺激20、24、48、72 h后CD3+T淋巴细胞表达高水平CD71，其阳性率分别为（85.30±0.86）%、(85.96±1.20)%、(88.32±2.34)%、(99.45±3.13)%，其中20、24、48 h呈一个平台期。应用1、0.5、0.25 mmol/L LTZ对ConA刺激下CD3+CD71+表达有显著抑制作用，其表达阳性率分别降至（30.26±1.62）%、（48.18±1.40）%、（72.18±2.43）%(均P＜0.01)，其中1、0.5 mmol/L LTZ组与阳性对照组〔（2.70±0.05）%〕及PBS对照组〔（71.56±1.34）%〕比较有显著性差异(均P＜0.01)，且呈一定的量效关系。 表1 LTZ对T淋巴细胞的增殖作用 3 讨 论 一般认为T淋巴细胞(T细