乳腺癌变的分子机制的分析研究.pdf

乳腺癌变的分子机制研究 前 言 乳腺癌已成为严重危害妇女健康的常见恶性肿瘤，其 发病率与死亡率呈增高趋势…。目前还不能用已知的单因 素及多因素来完全解释乳腺癌的发生与发展。乳腺增生症 (简称乳增症)是妇女最常见的非炎症非肿瘤性乳腺疾 患，由于对其本质、病理变化及其与乳腺癌的关系一直未 能研究彻底，故争论颇多。 由于肿瘤细胞在分裂过程中出现DNA合成的丢失和 不分离，而产生了DNA异常的细胞群，即DNA异倍体， 为恶性肿瘤的特异性标志【2J。正常乳腺组织表现为二倍 体。有证据表明，癌前病变不典型增生程度越高，DNA 异倍体出现的可能性越大【3l。DNA异倍体的检测对预测 和诊断癌变是一个重要而有价值的标志物。 p53基因是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基 因。1991年有作者应用流式细胞术(Flow Cytometry， FCM)分析了乳腺癌和乳腺良性病变细胞p53蛋白的表 达量，发现良性病变伴有导管上皮异型增生细胞的p53 蛋白表达量增高，说明p53蛋白的过量表达在乳腺正常细 胞转化一癌变过程中起直接参与作用。 目前认为，肿瘤的发生不仅与细胞增殖及分化的异常 有关，还涉及到细胞凋亡机制的异常。现已证实，原癌基 因bcl．2过度表达可通过抑制细胞凋亡来阻碍或延迟正常 细胞的分化，从而延长细胞的寿命，使细胞数目增多，增 加了基因变异的机率，有助于肿瘤的发生[4】。 本课题采用FCM技术对38例乳腺癌、33例癌旁组 织、20例乳增症和19例正常乳腺组织，进行了bel．2和p53 蛋白表达阳性的细胞比率检测，并研究其与DNA倍体和 细胞增殖活性的关系，旨在探讨乳腺癌的细胞动力学特征 及其在发生过程中的衍变规律，探讨乳腺的可能癌变机 理，为乳腺癌的I、II级预防提供更确切保障。 材料和方法 一、材料 治研究院门诊或住院的女性乳腺病患者，年龄】9—62岁， 中位年龄39岁。乳腺癌38例，癌旁组织33例，乳增症 20例，乳腺纤维腺瘤19例。病理诊断采用1997年舟山 中华医学会病理分会乳增症、乳腺癌组织学分类方案口]： 正常乳腺组织：取乳腺纤维腺瘤周围正常乳腺组织。 瘤旁正常乳腺组织19例。 乳增症组织：乳增症患者，临床上取有局限性乳腺肿 块、特别是那些经中西药物治疗而肿块及症状缓解不明显 的患者。乳增症组织学分类：①囊肿为主型(包括单纯性 囊肿和乳头状囊肿) ⑦腺病为主型(包括单纯性腺病、 硬化性腺病、结节性腺病、盲管腺病、微腺管腺病) ③ 纤维腺瘤样结构为主型④导管内乳头状瘤为主型(为增 生症中多发性小叶内或小叶外的末端小导管发生的乳头 状增生或微小导管乳头状瘤。不包括孤立性及多发性导管 内乳头状瘤)⑤非典型增生。本研究组①～④划归单纯性 增生，即分单纯性增生及非典型增生两大类。其中单纯性 增生18例，非典型增生2例； 乳腺癌及癌旁组织：取自患者手术标本乳腺癌灶及癌 旁组织。每一组织块分为二份，分别进行常规病理检查和 流式细胞仪检测，癌旁组织需经病理确诊为非癌组织。38 例乳腺癌中漫润性导管癌19例，漫润性小叶癌7例，导管 原位癌2例，小叶原位癌1例，髓样癌伴淋巴细胞浸润4 例，乳头状癌2例，小管癌1例，派杰病2例；癌旁组织： 单纯性增生27例，非典型增生3例，正常乳腺组织3例。 切取标本去除脂肪及血管组织后用PBS(磷酸缓冲 液)冲净，置．80℃超低温冰箱保存备用。 二、试剂、仪器及设备 (异硫氰酸荧光素)直接标记的小鼠抗人p53抗体、FITC 直接标记的阴性对照抗体；FITC直接标记的小鼠抗人 染液。 2．仪器及设备：．80℃超低温冰箱(SANYO公司)； 流式细胞仪(FACS 光器激发光源波长为488nm、输出功率[6row。 三、实验方法 1．取标本0．5．I．09，剪碎，用300目尼龙网过滤，收 上清液，调整细胞数为4x106／ml，50％乙醇4℃固定1 小时。 2．PBS漂洗离心悬液2次后均分入四只试管。分别 FITC直接标记的小鼠抗人p53抗体及阴性对照 加入20p．1 FITC直接