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聂燕芳 中山大学硕士拳位论文:T42M突爱型EPSP台成酶基崮醇矗隆和醋究
T42M突变型EPSP合成酶基因的克隆和研究
遗传学
硕士生;聂燕芳
指导教师:徐培林
摘要
鼙甘麟(Glyphosate)是一种广谱性有机磷类除草剂。因具有高效、对入畜
低毒、低残留、不破坏生态环境等优点,已成为全球广泛使用并最受信赖的除草
刺。它通过竞争性抑制植物和细菌莽草酸途径中的关键酶一5前醇式丙酮酰莽草
酸.3.磷酸合成酶(EPSP合成酶)而起杀伤作用。草甘膦作用于杂草的同时也非
选择性伤害农作物,因此培育抗草甘瞵作物已成为全球研究的热点。通过遗传工
程的方法克隆相关抗性基因,并将之旨八植物中使其获得抗草甘膦性状是目前培
育抗草甘麟作物最霄效的途径。
重组或突变EPSP合成酶,其中两个突变酶都发生了T42M突变。在此基础上,
率论文通过定点突变方法对走脑杆菌野生型aroA基因及以基因优化技术获得的
aroAMl基因作进一步改造,使其编码的EPSP合成酶的第42位氯基酸残基由苏
氨酸置换为甲硫氨酸。对获衙的两个T42M突变型EPSP合成酶的酶动力学性旗
研究表明,与相应对照相比,T42M突变酶的酶活力提简o.1~3.7倍,j‰fPEPI值
降低7.∞8.5结,KtIgl蛐。☆l值增大了O.06--30.7倍,从而使草甘膦抗性得到币同
程度的提琏。T42M突变型EPSP合成酶的研究将为探索酶结构和功能的关系以
及革甘磷与酶作用的模式提供理论依摆。
选用CaMV35S启动予.Nos
聂燕芳 中山丈学砸士学位诒芷T42M突变型EPSP台成酶蒜越的克隆和科究
以农杆菌为介导转化烟草。抗性榆捌结果显示转入T42M突变型EPSP台戒酶的
烟草能表现出相应的草甘瞵抗性,并且能够耐受商业推荐剂量草甘膦的处理,这
为越后培育抗革甘膦农作物提供了可选择的抗性基斟。
关键词:草甘膦.EPSP合成酶,T42M突变。转基因烟草
聂燕芳 中山大学硕士学位论史;T42M突变型EPSP合成酶基因的克强和研究
andResearchofAT42MSubstitution
Cloning
inEPSP
Synthase
Genetics
Nie
Name:Yanfang
Xu
Supervisor:Peilin
ABSTRACT
isanon-selective herbicidethatinhibits5-enol-
Glyphosate broad-spectrum
inthe
pyruvyl-shikimate一3一phosphatesynthase(EPSPsynthas曲,akeyenzyme
aromaticaminoacid in and of
biosynthetic microorganismsNants.Mutants
pathway
classIEPSP withresistanceto were ina
synthase produced
glyphosat
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