T42M突变型EPSP合成酶基因的克隆和的分析研究.pdfVIP

T42M突变型EPSP合成酶基因的克隆和的分析研究.pdf

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聂燕芳 中山大学硕士拳位论文:T42M突爱型EPSP台成酶基崮醇矗隆和醋究 T42M突变型EPSP合成酶基因的克隆和研究 遗传学 硕士生;聂燕芳 指导教师:徐培林 摘要 鼙甘麟(Glyphosate)是一种广谱性有机磷类除草剂。因具有高效、对入畜 低毒、低残留、不破坏生态环境等优点,已成为全球广泛使用并最受信赖的除草 刺。它通过竞争性抑制植物和细菌莽草酸途径中的关键酶一5前醇式丙酮酰莽草 酸.3.磷酸合成酶(EPSP合成酶)而起杀伤作用。草甘膦作用于杂草的同时也非 选择性伤害农作物,因此培育抗草甘瞵作物已成为全球研究的热点。通过遗传工 程的方法克隆相关抗性基因,并将之旨八植物中使其获得抗草甘膦性状是目前培 育抗草甘麟作物最霄效的途径。 重组或突变EPSP合成酶,其中两个突变酶都发生了T42M突变。在此基础上, 率论文通过定点突变方法对走脑杆菌野生型aroA基因及以基因优化技术获得的 aroAMl基因作进一步改造,使其编码的EPSP合成酶的第42位氯基酸残基由苏 氨酸置换为甲硫氨酸。对获衙的两个T42M突变型EPSP合成酶的酶动力学性旗 研究表明,与相应对照相比,T42M突变酶的酶活力提简o.1~3.7倍,j‰fPEPI值 降低7.∞8.5结,KtIgl蛐。☆l值增大了O.06--30.7倍,从而使草甘膦抗性得到币同 程度的提琏。T42M突变型EPSP合成酶的研究将为探索酶结构和功能的关系以 及革甘磷与酶作用的模式提供理论依摆。 选用CaMV35S启动予.Nos 聂燕芳 中山丈学砸士学位诒芷T42M突变型EPSP台成酶蒜越的克隆和科究 以农杆菌为介导转化烟草。抗性榆捌结果显示转入T42M突变型EPSP台戒酶的 烟草能表现出相应的草甘瞵抗性,并且能够耐受商业推荐剂量草甘膦的处理,这 为越后培育抗革甘膦农作物提供了可选择的抗性基斟。 关键词:草甘膦.EPSP合成酶,T42M突变。转基因烟草 聂燕芳 中山大学硕士学位论史;T42M突变型EPSP合成酶基因的克强和研究 andResearchofAT42MSubstitution Cloning inEPSP Synthase Genetics Nie Name:Yanfang Xu Supervisor:Peilin ABSTRACT isanon-selective herbicidethatinhibits5-enol- Glyphosate broad-spectrum inthe pyruvyl-shikimate一3一phosphatesynthase(EPSPsynthas曲,akeyenzyme aromaticaminoacid in and of biosynthetic microorganismsNants.Mutants pathway classIEPSP withresistanceto were ina synthase produced glyphosat

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