E.coli对昆虫离体细胞(Hz、SE、5B1)诱导的的分析研究.pdfVIP

摘 要 本文用热灭活的E．coil诱导三种昆虫离体细胞(1tz、SE、581)，从细胞形态观察，诱 导上清活性测定，诱导动力学和SDS—PAGE分析四个方面开展了研究工作。 ， hr后有细 f热灭活的E．coli加入细胞培养基后，在Hz细胞中未观察到菌体消失，24 I 胞漂浮，细胞逐渐破裂死亡；在SE、581细胞，可以看到许多菌体吸附于细胞表面，生长增 殖受抑制，观察到菌体减少直至消失；在581细胞中的E．coil消失速度明显比SE细胞中 的E．coil消失速度快f重新加入新鲜培养基后，SE、581细胞都能恢复生长增殖。 以1000 bacteria／cell诱导SE、581细胞，2dhr后收集细胞上清，检测细胞上清活性， 发现细胞上清有溶菌酶、促生长类物质和抗苗肽活性(抗菌肽有耐热性)，581细胞的上清 活力均比SE细胞上清活力高(SE细胞上清抗菌肽活力不明显)。 诱导动力学研究表明：诱导4hr后，SE、581细胞上清的溶菌酶、促生长物质活力升 高，z4hr活力最高，再延长时间，细胞上清活力下降；诱导4hr后，581细胞上清抗菌活 力升高，20hr抗菌活力晟高，再延长时问，则抑菌活力迅速下降}抗菌活力达到最高的时 bacteria／ 间比溶菌酶和促生长物质活力达到最高的时间要早。诱导物浓度在500一2000 cell可诱导SE细胞上清活力升高，其中以1000bacteria／cell诱导效果最佳．当诱导物浓 度大于3000 bacteria／cell均可诱导581细胞上清活力升高，其中以2000bacteria／cell诱导效果最好； 581细胞能比SE细胞忍受更大浓度的诱导物。 KDa、 sDs—PAGE分析表明：SE细胞经诱导后有三条加强带，分子量分别为：10．4 12．5 KDa、20．5KDa．581细胞诱导后，也有这三条加强带，通过活性测定。推测为溶菌酶 和促生长类物质。581细胞除了上述三条加强带外，还有6条加强带．分子量分别为13．5 KDa、17．0KDa、27．0KDa、30．5KDa、41．0KDa、45．0 KDa、 KDa，其中分子量为13．5 清活性比较，推测为抗菌蛋白。 关键词： 昆虫离体细胞诱导溶菌酶抗菌肽 Abstract in inducedtreatmentwithIlear— ThreeinsecteelIlinesvitro(Hz、SE、5BI)wcre by killedEschericbiacoli．Wehavestudiedat[our aspects：eelImorphologyobserving， indeucedactivities ofinducedactivitiesandinduced assay proteins detecting，dynamical aDS—PAGE． by analysing Wedidn’L otbacteriaatHz cellwele observe eell{After24hr，Hz disappearmcnt