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第十四章 荧光分析法 第一节 概述 优点：A.灵敏度高， 检出限10-10~10-12g/ml （紫外：10-7g/ml) B.选择性好。 C.试样量少和方法简便 D.提供比较多的物理参数 缺点：应用范围较窄 干扰因素多 二、基本原理 振动弛豫：从同一电子能级的各较高振动能级逐步返回到最低振动能级。 内部能量转换：两个电子能级之间的能量转换。 外部能量转换：激发态分子与溶剂分子或其它荣指分子相互作用及能量转移。 体系间跨越：指不同多线态间的无辐射跃迁。 激发光谱与发射光谱的关系 一、分子结构与荧光的关系 （一）荧光物质的必要条件 分子产生荧光，必须具备两个条件： （1）物质分子必须有强的可见-紫外吸收 分子结构应具有共轭结构（或含不饱和杂原子基团），产生 跃迁或 跃迁 （2）分子吸收辐射能后，必须具有一定的荧光量子产率。 即荧光效率（ ）应足够大。 通常：0 1 （二）分子结构与荧光的关系 1.跃迁类型：K带强吸收 激发: 发射: 2.长共轭结构物质，易产生 共轭程度越大，产生荧光强度越强，荧光效率越大，波长长移。 例： 苯 萘 蒽 9-乙烯蒽 λex 205 286 356 λem 278 321 404 432 φf 0.11 0.29 0.36 0.76 共轭键越长，荧光强度越大，荧光波长长移。 3.分子刚性和共平面性结构（刚性共平面结构） 大多数具有刚性共平面结构的有机物具有强烈的荧光 例： 联苯 芴 例1：哪个荧光强度强？ 8-羟基喹啉 8-羟基喹啉镁 1-二甲胺基-7-磺酸盐 4.取代基 （1）对共轭体系作用大的给电子基团，增加共轭效应，使荧光效率增强，荧光波长长移。 例：-OH，-OR，-NH2，-CN，-NR2等饱和杂原子基团。 （2）对共轭体系作用大的吸电子基团，减弱 π 电子共轭性，使荧光减弱甚至熄灭。 例：-COOH，-NO2，-C=O， -NO，-SH，-NHCOCH3， -F，-Cl，-Br,-I等。 （3）对共轭体系作用效小的基团，对荧光的影响不明显。 例： -R，-SO3H，-NH3。 三、影响荧光强度的外部因素 1、溶剂 一般：溶剂极性增大，荧光强度增大，波长长移。 溶剂粘度减小，荧光强度减弱。 8-巯基喹啉的荧光峰位置和荧光效率与溶剂介电常数的关系 溶剂 介电常数 荧光峰位λnm 荧光效率φf CCl4 2.24 390 0.002 CH3Cl 5.2 398 0.041 丙酮 21.5 405 0.055 乙腈 38.8 410 0.064 3．溶液 PH值 PH值会影响酸或碱的离解，因此，PH值不同，物质荧光强度也不同 例 4． 氢键的影响 散射光有两种： 瑞利光： 光子和物质分子发生弹性碰撞时，不发生能量交换，仅是发生运动方向改变 拉曼光： 光子和物质分子发生非弹性碰撞时，光子的运动方向及能量均发生改变，这种散射光称拉曼光。 瑞利光波长与激发光波长相同 拉曼光波长比激发光波长长。 消除拉曼光干扰的方法是： 测量时选择适当的激发波长 思考题 如何区别荧光、磷光、瑞利光和拉曼光？