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植物表达载体p3301-35S-ZmPP2C3 的构建
植物表达载体p3301-35S-ZmPP2C3 的构建 专 业:生物科学 姓 名: 学 号: 指导老师: 目 录 1 引言 2 材料与方法 3 结果与分析 4 讨论与结论 1 引 言 1.1 蛋白磷酸酶2C基因简介 蛋白磷酸酶2C(Protein Phosphatas2C,PP2C)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶,它是蛋白磷酸酶的一个分支,在体内以单体形式存在,其活性严格受二价离子尤其是Mn2+和Mg2+的调节。作为植物体内最大的一类磷酸酶家族,PP2C具有其独特的蛋白结构和生化特性。直到今天在拟南芥基因组中共发现112个磷酸酶基因,其中有76个为PP2C基因。 1 引 言 1.1.3蛋白磷酸酶2C的功能 PP2C是一类有多种功能的蛋白磷酸酶,它作为一种调控蛋白,在植物中可直接或间接通过去磷酸化作用调控蛋白激酶级联信号系统。而且通过研究已经揭示,高等真核生物中的PP2C是逆境胁迫信号激活的激酶通路中的一种负调控因子。 1 引 言 1.5 本研究的目的意义 蛋白磷酸酶2C(PP2C)是蛋白磷酸酶中的一大类,广泛参与逆境信号的传递过程。在本实验前期工作中从玉米中得到一个新的PP2C基因,将其命名为ZmPP2C3。已对它的表达特性和功能进行了一些初步研究。本论文将植物表达载体p3301-35S与ZmPP2C3编码区连接,命名为p3301-35S-ZmPP2C3,然后转化大肠杆菌,将重组质粒经PCR检测和酶切鉴定,植物表达载体构建成功,后转化农杆菌,为进一步转化植物材料,研究其抗逆功能奠定基础。 2 材 料 与 方 法 2.1实验材料的采集与处理 菌株与载体:农杆菌EHA105,p3301-35S 由本实验室 保存,载体p3XP由本实验组构建保存。 。 实验材料:烟草NC89 2.2技术路线 3 结 果 与 分 析 3.1 P3XP质粒提取及双酶切 3 结 果 与 分 析 3.2 P3301-35S-ZmPP2C3 植物载体构建 3 结 果 与 分 析 3.3 p3301-35S-ZmPP2C3表达载体转化农杆菌感受态 3 结 果 与 分 析 3.3 p3301-35S-ZmPP2C3表达载体 转化农杆菌感受态的鉴定 3 结 果 与 分 析 3.4 烟草幼苗培养
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