利用Xuri系统的T细胞分离与扩增培养方案.PDF

GE医疗中国 利用Xuri™系统的T细胞 分离与扩增培养方案 PBMC分离 准备 7. 在18～20℃室温下以400×g离心10分钟，制动器开启。 使用新鲜收集的白细胞样品（最好24小时）。 慢慢地将50 mL含有2% HI人血清的PBS的细胞混合液 小心小心 处理血液：当处理血液时采取必要的防护措 重悬，重复该离心步骤。然后吸出上清并重悬离心管 施，并遵循当地风险评估指南。 中剩余的细胞悬液。 程序 8. 合并所有离心管中的细胞悬液到一个无菌瓶内，采样 1. 通过适当的管路将白细胞从收集袋转移到无菌瓶中。 用于细胞计数。测定从制备物中回收的活细胞总数。 所有的操作应使用良好的无菌技术并在Ⅱ级生物安全 可以使用各种方法测定活细胞数。大多数方法是 柜中进行。 基于台盼蓝染色实验。 2. 在含有2%热灭活(HI)人血清的磷酸盐缓冲液（PBS）中 9. 吸出25mL细胞悬液至一个150mm培养皿中（组织培 以1:1稀释白细胞样品，并轻轻涡旋混匀。 养塑料制品），然后再添加10mL完全培养基，得到35mL 在开始前确保含有2% HI人血清的PBS和Ficoll- 的总体积。 Paque™ PREMIUM (1.077 g/mL)处于约18到20℃ 这一步骤需要从制备物中去除单核细胞。通常这 的环境中。如果在1:1稀释后总体积小于100 mL， 将需要大约8个培养皿。 则添加PBS（含有2% HI人血清）以补足到100mL。 10. 在5%CO2的37℃培养箱中孵育培养30到60分钟，实 3. 准备4根含有15mL Ficoll-Paque PREMIUM (1.077g/mL) 现单核细胞在塑料培养皿上的贴壁。 的50mL离心管。小心添加25 mL稀释的血液样品到 液面上，保证层间尽可能不发生混合。所有4根离心 在进行下一步收获步骤前，请在30～60分钟之间使 管重复操作。 用光学显微镜检查单核细胞的贴壁情况。 操作快速而小心，不要让分层梯度保持长时间，因为 11. 使用板上剩余的培养基轻轻地洗涤培养皿表面，然后 这可能带来离心前各层的混合，导致回收率差。 将收获的非贴壁细胞转移至50 mL离心管中。另外加 入15mL完全培养基到每个培养皿以回收尽可能多的 4. 在18～20℃室温下利用最大的加速度以400×g离心 非贴壁细胞，收获到50mL离心管中。 30分钟，关闭制动。 12. 室温下以400 × g离心5分钟，开启制动。 5. 从离心机中小心地取出离心管，防止各层混合。在无 菌条件下，缓慢地吸出血浆和血小板部分，不要干 13. 重悬并合并细胞到50mL离心管中，用完全培养基将 扰界面上的白色单核细胞层。 终体积调至50mL。 6. 使用巴斯德吸管小心吸出单核细胞层，转