实验三植物染色体标本制作.ppt

实验三 植物染色体标本制作 一 实验目的 学习将根尖细胞压片及花粉母细胞涂片的临时染色体玻片改为永久片的制作方法。 二 实验原理 用植物根尖细胞压片或花粉母细胞涂抹制成的片子，如材料染色清晰、物像符合要求，一般可用石蜡、甘油胶冻或指甲油将盖玻片的四周封固制成临时片，贮于冰箱中，保存观察一周左右。但时间过长，物像收缩、颜色变深，将难以观察鉴别。因此，对一些需要长期保存的片子，必须改制为永久片，以便进一步观察和研究。 永久片的制作过程包括脱去临时片的盖玻片、材料脱水、透明和封片。其中材料脱水干净和透明良好是制成永久片的关键。为此，需选用适当的脱水剂和透明剂。目前较理想的脱水剂是正丁醇和叔丁醇，它们都能与最常用的脱水剂乙醇混合使用，并具有良好的透明效果，且能与封藏剂树胶混合，有利于封片，材料也不会发生收缩和硬化等问题。 三 实验材料 经镜检物像清晰符合要求的洋葱、大麦、棉花或蚕豆等根尖有丝分裂，玉米或小麦等花粉母细胞减数分裂的临时片子。 四 实验用具与药品 实验用具 显微镜 冰箱 培养皿 刀片 解剖针 鸭嘴镊子 玻璃棒 纱布 毛笔 吸水纸 标签 实验药品 正丁醇 95%酒精 冰乙酸 二甲苯 中性树胶 五 实验步骤（1） 脱盖玻片：用刀片把临时片上盖玻片周围的石蜡刮净，用毛笔刷掉石蜡屑后，再蘸少许二甲苯擦去残留的石蜡，或用45%乙酸除去水溶的封藏剂。如刚作的临时片，最好过几个小时候后再进行脱片。把临时片翻转，盖玻片朝下，放入盛有盖玻片液（3份45%乙酸=1份95%酒精）的培养皿中，将载玻片的一端搁在短粗玻璃棒上，呈倾斜状，让盖玻片自然滑落。盖玻片脱落后2~3min，分别取出盖玻片和载玻片，用吸水纸将玻片上的溶液吸干，注意不要触动载玻片上的材料。 五 实验步骤（2） 脱水、透明：取三只培养皿，分别编号2、3、4，在其中各放一根短粗玻璃棒，顺序加入下列脱水剂：2号培养皿加2份95%酒精+1份正丁醇；3号培养皿加1份95%酒精+2份正丁醇；4号培养皿加正丁醇。操作时，用鸭嘴镊子把1号培养皿中已脱落的盖玻片和载玻片从盖玻片液中取出，稍干后迅速放入2号培养皿中。依次脱水、透明，最后放入4号培养皿中，在各编号培养皿中分别浸泡5min左右。整个脱水过程中，必须保持载玻片和盖玻片原来相对的方向和位置，同时注意操作轻巧，以免造成玻片上材料漂失。 五 实验步骤（3） 封片：从4号培养皿中取出载玻片和盖玻片置于滤纸上吸去多余的溶剂，在载玻片中央载有材料处滴上1~2滴中性树胶，将盖玻片盖回原来位置进行封片。覆盖盖玻片时，要注意用鸭嘴镊子夹住盖玻片，轻轻地倾斜覆盖，使之随着树胶的扩展自然下滑，切不可施加压力或移动盖玻片。如发现封片中树胶有气泡，应让其自行逸出或用针尖烧热后烫一下，使气泡逸出。如数胶滴得过多溢出玻片四周，应待树胶晾干后，用脱脂棉蘸二甲苯轻轻擦净溢出的树胶。封片后平放晾干，进行镜检，物像清晰符合要求的保存，并贴上标签，注明标本名称、作者姓名和制作日期。 六 实验结果 制作清洁完整的有丝分裂永久片1张。 镜检观察制作的有丝分裂永久片，记录永久片中出现的分裂时期。 * * *