辐射跃迁与荧光相比.pptVIP

§12.1 概述 §12.3 荧光仪器 §12.4 荧光分析方法 7、其它干扰因素 散射光和拉曼光：溶剂的瑞利散射光、容器表面的散射光、胶粒的散射光以及溶剂的拉曼光的干扰。 荧光峰的波长和激发光的波长很靠近，则由散射光所引起的误差十分严重。可以调节荧光计的狭缝宽度以减弱散射光的强度，但同时也将降低荧光的强度，所以实际测定时需选择适当的狭缝宽度。 荧光污染：溶液中微生物的产生 滤纸中的杂质 洗涤器皿的合成去污剂常能产生很强的荧光。 表面吸附也会对稀溶液的荧光测定造成影响。 除瑞利散射外，通常还可以发现另一种比激发光波长稍长的散射光，有时还可以观察到波长比激发光稍短的散射光，这类散射光称拉曼光。 LS55荧光/磷光/发光分光光度计 美国PE公司 荧光/分光光度计工作原理图 1. 光源 常用光源有高压汞灯、氙灯和卤钨灯。 2. 单色器 荧光计使用滤光片作色散元件，滤光片分激发用滤光片和荧光用滤光。 3. 样品池 常用石英池，形状为正方形或长方形。 4. 检测器 在荧光计中常用光电池或光电管；在荧光分光光度计中常用光电倍增管。 一、常规的荧光分析法 1、直接测定 许多有机芳族化合物和生物物质具有内在的荧光性质，它们往往可以直接进行荧光测定。 * 第十二章 荧光分析法 §12.1 概述 §12.2 影响荧光光谱和荧光强度的因素 §12.3 荧光仪器 §12.4 荧光分析方法 一、荧光的发现及发展 当紫外或可见光照射到某些物质上时，这些物质就发射出波长和强度各不相同的光线，停止照射光照射时，这种光线马上或逐渐消失，这就是荧光。 Stokes在1852年详细考察了奎宁和叶绿素的荧光 1867年Goppetsroder采用桑色素为荧光试剂荧光法检测铝 Wawwillous进行了荧光产率的测定(1924年) Gavilaui对荧光寿命进行了测定(1926年) 二、荧光产生的理论基础 内转换 内转换 S2 系间跨越 振动弛豫 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 振动弛豫 S0，S1和S2分别表示分子的基态、第一和第二激发单重态； T1、T2则分别表示分子的第一和第二激发三重态。 1、分子能级与跃迁 三重态能级比相应单重态能级低 传递途径 辐射跃迁 荧光 延迟荧光 磷光 内转换 外转换 系间跨跃 振动弛豫 非辐射跃迁 2、分子的去激发过程 电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和非辐射跃迁等方式失去能量回到基态。 (1) 振动弛豫：同一电子能级内以热能量交换形式由高振动能级至低相邻振动能级间的跃迁。发生振动弛豫的时间10 -12 s。 (2) 内转换：同多重态电子能级中，等能级间的无辐射能级交换。 非辐射跃迁 S0 S2 S1 T1 吸收 吸收 振动弛豫 S0 S2 S1 T1 吸收 吸收 内转换 (3) 系间跨越：不同多重态，有重叠的转动能级间的非辐射跃迁。 (4) 外转换：激发分子与溶剂或其他分子之间产生相互作用而转移能量的非辐射跃迁；外转换使荧光或磷光减弱或“猝灭”。 S0 S2 S1 T1 吸光 吸光 荧光 系间跨越 (1) 荧光：第一激发单重态的最低振动能级→基态。 (2) 磷光：第一激发三重态的最低振动能级→基态。 辐射跃迁 与荧光相比，磷光具有如下三个特点： 磷光辐射的波长比荧光长 分子的T1态能量比S1态低。 磷光的寿命比荧光长 荧光是S1? S0跃迁产生的，自旋允许的跃迁 磷光是T1?S0跃迁产生的，自旋禁阻的跃迁 S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1 三、荧光激发光谱和荧光发射光谱 1、激发光谱 荧光物质在不同波长的激发光作用下测得的某一波长处的荧光强度的变化情况，也就是不同波长的激发光的相对效率。 固定荧光发射波长(通常是荧光强度最大波长)和狭缝宽度，扫描得到荧光激发波长和相应荧光强度的关系曲线，即荧光激发光谱，用?ex表示。 荧光光谱获得的过程。 固定激发波长和狭缝宽度，扫描得到荧光发射波长和相应荧光强度的关系曲线，即荧光光谱。 荧光强度最强的波长为最大荧光发射波长，用?em表示。 2、荧光发射光谱 F ?/nm 3、激发光谱与发射光谱的关系 (1) 斯托克斯(Stokes)位移 在溶液中，分子荧光的发射光谱相对于激发光谱位移到较长的波长。 (2) 镜像对称规则 通常荧光发射光谱和它的激发光谱(或吸