博士历年考试蛋白质蛋白质组学总结.docVIP

蛋白质组学内容包括：蛋白质结构、分布。蛋白质功能、丰度变化。蛋白质修饰、蛋白质间相互作用、蛋白质与疾病的关联性 蛋白质组（proteome） 指的是基因编码的全部蛋白质，某一物种、个体、器官、组织乃至细胞的全部蛋白质。 蛋白质组研究的核心是系统识别一个细胞或组织中表达的每一个蛋白质，以确定每个蛋白质的突出特征。其分析技术包括分离蛋白质和肽的分离科学、识别和定量分析物的分析科学和数据管理及其分析的生物信息学。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别，它随着组织、甚至环境状态的不同而改变. 在转录时，一个基因可以多种mRNA形式剪接，并且，同一蛋白可能以许多形式进行翻译后的修饰. 故一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物，蛋白质组中蛋白质的数目有时可以超过基因组的数目. 研究意义 蛋白质是生理功能的执行者，是生命现象的直接体现者，对蛋白质结构和功能的研究将直接阐明生命在生理或病理条件下的变化机制。蛋白质本身的存在形式和活动规律，如翻译后修饰、蛋白质间相互作用以及蛋白质构象等问题，仍依赖于直接对蛋白质的研究来解决。虽然蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。 传统的对单个蛋白质进行研究的方式已无法满足后基因组时代的要求。这是因为：(1) 生命现象的发生往往是多因素影响的，必然涉及到多个蛋白质。(2) 多个蛋白质的参与是交织成网络的，或平行发生，或呈级联因果。(3) 在执行生理功能时蛋白质的表现是多样的、动态的，并不象基因组那样基本固定不变。因此要对生命的复杂活动有全面和深入的认识，必然要在整体、动态、网络的水平上对蛋白质进行研究 Global proteomics:identify and catalog all possible proteins in an organism. Targeted proteomics identify and catalog a subset of proteins involved in a specific pathway, disease ,or other specific facet you wish to study. Structural proteomics . determine the 3-D structure of all proteins 蛋白质组研究的三大基本支撑技术：双向电泳技术、计算机图像分析与大规模处理技术以及质谱技术。 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF) 主要技术包括：基质辅助激光解吸电离技术和线性飞行时间质量检测器 MALDI的原理 将分析物分散在基质分子(尼古丁酸及其同系物)中并形成晶体，当用激光(337nm的氮激光)照射晶体时，基质分子吸收激光能量，样品解吸附，基质－样品之间发生电荷转移使样品分子电离。基质的使用是这一电离技术的关键，基质吸收了激光的大部分能量并气化，同时将样品分子带入气相，样品分子只吸收少量激光能量，避免了分子化学键的断裂。基质在样品离子形成过程中充当了质子化或去质子化试剂，使样品分子带上正电荷或负电荷。 TOF 原理 离子源中每一脉冲激光产生的离子先经过一个加速电场，获得动能，再进入一个高真空无电场飞行管道．离子在此无电场飞行管道内以在加速电场获得的速度飞行。质量较轻的离子飞行速度快，较早到达检测器，较重的离子飞行速度慢，较晚到达检测器，离子的飞行时间与其质荷比的平方根(m／z) 成正比，通过检测飞行时间来测定离子的质荷比。 3、运用生物质谱技术鉴定蛋白质 肽质量指纹谱(peptide mass fingerprinting，PMF)鉴定蛋白质 串联质谱（MS/MS）数据鉴定蛋白质技术 PMF原理： 主要是利用蛋白质的各种属性参数(attribute parameter)如相对分子质量、等电点、序列、氨基酸组成、肽质量指纹谱等在蛋白质数据库中检索，寻找与这些参数相符的蛋白质。 用PMF鉴定蛋白质是目前蛋白质组研究中较为常用的鉴定方法．这一技术于1993年被多个研究小组分别独立提出，肽质量指纹谱是指蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于每种蛋白质的氨基酸序列(一级结构)都不同，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段序列也各不相同，其肽混合物质量数亦具特征性，所以称为指纹谱，可用于蛋白质的鉴定，即用实验测得的蛋白质酶解肽段质量数在蛋白质数据库中检索，寻找具有相似肽指纹谱的蛋白质。电泳胶上的蛋白质可被原位酶切或转印到PVDF膜上酶切得到肽混合物，经质谱分析得到PMF，检索数据库进行鉴定。还可以选取肽混合物中的某一肽段通过串联质谱测序鉴定 . 三、应用 1、在肿瘤研究中的应用 蛋白组学技术