江苏省宝应县画川高级中学高三生物一轮复习-专题五-DNA的粗提取与鉴定学案（无答案）.docVIP

DNA的粗提取与鉴定 考点梳理 考点一、DNA粗提取的原理 1、DNA在NaCl溶液中的溶解性 说明：DNA和蛋白质等成分在不同NaCl溶液浓度中溶解度不同，通过控制NaCl溶液浓度达到分离目的。 画出DNA在不同浓度NaCl溶液中的溶解度曲线，并根据曲线图思考 ①在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 2、DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA进一步“提纯”。 3、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解 ，但是对 没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC的高温，而DNA在 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解 ，但对DNA没有影响。 考点二、DNA粗提取与鉴定实验过程 1、实验材料的选取 ①请从下面的材料中选取适合的（花菜、鸡血、猪血、洋葱） ②取材的原则是：一是组织材料中含较多的 ；二是取材时，要注意保护环境，不要将 的生物作为实验材料。 ③本实验为什么不能选用猪血细胞作为实验材料？ 2、破碎细胞，获取含DNA的滤液 如果本实验选取的实验材料是鸡血和洋葱，在破碎细胞获取含DNA的滤液时，所采用的方法有什么不同？ 鸡血： 洋葱： ①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ 提示：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。 ②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 提示：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 ③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响? 提示：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 ④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 提示：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。 3、去除滤液中的杂质 说出下列三种方案的“去杂”原理 ①再次使用不同浓度的NaCl溶液，分别使用2mol/L 0.14mol/L该溶液，“去杂”的对象分别是什么？ ②在滤液中加入“嫩肉粉”（含木瓜蛋白酶），让其反应15分钟。 ③将滤液放在60-75℃的恒温水浴箱中保温15分钟。 4、DNA的析出与鉴定 ①要使滤液中的DNA析出，需要加入一种特殊的溶液，加入后还需静置2-3分钟。这种特殊的溶液是什么？静置的目的是什么？此时，溶液中会看到什么现象？怎样用玻璃棒卷起？被卷起的“丝状物”是一个DNA分子吗？ ②如何对提取的DNA进行鉴定？（想一想：细胞中DNA如何鉴定？） 考点三、PCR技术（体外DNA分子扩增） 以下为体外扩增仪中PCR过程示意图 说明：第一轮的产物作为第二轮的模板再经历上述三个步骤，如此循环。 1、变性：当温度上升到 以上时，双链DNA解旋为单链。（想一想：在细胞内DNA复制时，是怎样完成这一步骤的？） 2、复性（退火）：当温度下降到 左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。（想一想：在细胞内这一过程需要引物作用吗？） 3、延伸：当温度再次上升到 时，溶液中的四种 在 酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。（想一想：与细胞内相比，该酶作用有什么特点？它是怎样工作的？） 强调：引物是指能够与DNA母链的一段碱基序列互补配对的一小段DNA或RNA，PCR技术只能特异地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数增长。 作为引物对，在设计时要关注哪些要素？ 4、PCR技术和DNA复制的比较（寻找共同点和不同点） DNA复制 PCR技术 场所 原理 酶 条件 原料 特点 典题赏析 例1、某同学在做PCR反应实验时，最关键的是需要控制（ ） A、氧气的浓度 B、酸碱度 C、温度 D、大气的湿度 例2、（2011江苏卷）在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是（ ） A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2mol/NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 例3、多聚酶链式反应（PCR）