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电泳技术简介 电泳技术简介 电电泳泳技技术术简简介介 电泳法，是指带电荷的供试品（蛋白质、核苷酸等）在惰性支持介质（如纸、 醋酸纤维素、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中，于电场的作用下，向其 对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，用适宜 的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其百分含量的方法。 电泳技术的基本原理和分类 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与 电场强度（E）的乘积。F＝QE 质点的前移同样要受到阻力（F）的影响， 对于一个球形质点，服从Stoke定律，即：F′＝6πrην式中r 为质点半径，η 为介质粘度，ν为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F＝F′即Q E＝6πrην 可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比， 与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因素外，电泳体系中其它因素 也影响质点的电泳迁移率。 电泳法可分为自由电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。 前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度 梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄 板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。 自由电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求 严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较 广泛。本节仅对常用的几种区带电泳分别加以叙述。 service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm sseerrvviiccee@@110000bbiiootteecchh..ccoomm 影响电泳迁移率的因素 ⒈电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。 如以滤纸作支持物，其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为 20cm，测得的电位降为200V，那么电场强度为200V/20cm＝10V/cm。当 电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm 时为常压电泳。电压在500V 以上， 电场强度在20-200V/cm时为高压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加 速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。 pH pH ⒉溶液的ppHH值溶液的pH 决定被分离物质的解离程度和质点的带电性 质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（-COOH），又有 碱性基团（-NH ）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子 2 的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该 蛋白质的等电点（isoelctric point，pI）。若溶液pH 处于等电点酸侧，即p H＜pl，则蛋白质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液pH 处于等电点碱 侧，即pH＞pl，则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH 离pl 越远，质 点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选 择合适的pH值缓冲液。 ⒊溶液的离子强度电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降 低。其原因是带电质点吸引相反符合的离子聚集其周围，形成一个与运动质 点符合相反的离子氛（ionic atmosphere），离子氛不仅降低质点的带电量， 同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低 缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量， service@100 service@100 wwwwww..110000bbiiootteecchh..ccoomm sseerrvviiccee@@110000bbiiootteecchh..ccoomm 改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度I 表示。 ⒋电渗 在电场作用下液体对于固体