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——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 工业微生物及育种学实验 Part Ⅰ 实验基本操作技能 实验一 无菌技术及培养基的制备 主要参考资料 微生物学实验指导：黄秀梨 ，高等教育出版社 ，2002 微生物学实验教程：杨革 ，科学出版社 微生物学教程（第2版）：周德庆 ，高等教育出版社，2000 《工业微生物实验操作手册》，诸葛健，轻工出版社，1997。 《伯杰士细菌系统发育手册》、《真菌鉴定手册》、《酵母鉴定手册》、《放线菌鉴定手册》等工具书 成绩评定 单独设课，作为一门独立课程严格进行成绩考核。本门课程成绩评定由平时成绩（80%）+实验理论考试（20%）组成。 平时成绩包括下列项目： ①实验纪律及准备（20％） ②平时实验操作和技能（25％） ③实验报告（20％） ④实验设计创新能力及其它能力（15％） 实验考试为理论及实践结合的考试，随机从题库中抽取题目，分为： (1)微生物学实验的基本操作技能，包括根据菌落形态鉴别所属菌类，制片镜检，选择相应的配方，配制斜面、平板培养基，包扎灭菌，在培养基上进行分离接种操作等； (2)设计一个大型综合实验的具体实验方案。 相对应的考核方法为： (1)由学生从题库中随机抽取5道题，现场口头回答，每题2分力，教师根据其回答情况评分，一共10分； (2)开卷，在大型综合实验，即实验四进行之前完成，占10分。 实验安排 模块 实验项目 学时 备注 I 培养基的制备 6 必做 微生物的分离纯化 8 必做 微生物显微技术 6 必做 II 曲药中高温芽孢菌的分离及初步鉴定 12 选做 酿酒微生物生产特性的检测 12 选做 窖（曲）房空气微生物的检测 12 选做 酿酒酵母的诱变及高乙醇耐受性菌株的筛选 12 选做 四大类型菌DNA的提取及PCR扩增 12 选做 实验报告内容 目的要求 实验原理 实验材料 实验步骤 结果及讨论 1.1 无菌技术及培养基的制备 （1）微生物培养的常用器具及其灭菌 （2）培养基配置的一般过程 （3）选择培养基 1、 Petri dish （1）微生物培养的常用器具及其灭菌 （2）培养基制备的一般程序 调配 ? 过滤 ? 矫正pH ?分装过滤 ? 灭菌（一般121.3℃，20-30min） ? 鉴定是否有菌 ? 放入冰箱冷藏备用 鉴定是否有菌可将培养基置于37 ℃培养24小时，然后观察 培养基： 液体培养基； 固体培养基； 半固体培养基； 固体培养基； 半固体培养基； 琼脂 实验室常用培养基 肉膏蛋白胨培养基： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15-20g，水1000ml，pH7.0-7.2； 淀粉琼脂培养基（高氏1号培养基）： 可溶性淀粉20g，KNO31g，NaCl0.5g，K2HPO40.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水1000ml，pH7.0-7.2; PDA培养基： 马铃薯（去皮）200g，蔗糖或葡萄糖15g，琼脂15-20g，水1000ml; 因高压之后pH值会下降0.1左右，所以矫正pH时应比所需的pH高 e.加棉塞，包装。 待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制 高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌； （3）选择培养基 富集培养 从自然界中分离到所需的特定微生物 特定的环境条件 仅适应于该条件的微生物旺盛生长 待分离微生物在群落中的数量大大增加 营养和生理条件几乎可无穷尽组合? 根据微生物的特殊要求，分离特定已知微生物种类； 分离培养在特定环境中能生长的微生物； 二元培养物 病毒和宿主细胞； 纤毛虫、变形虫和粘细菌捕食细菌等； 蛭弧菌 * * ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 ——宜宾学院 工业微生物与育种学实验 * *