第 章 酵母菌的遗传.pptVIP

转换是由HO基因引发的, 而HO基因本身以一种十分有趣的方式被调控, HO基因的转录受几种调控影响: (1)HO的转录受接合型基因的调控,它不在MATa/MATα二倍体细胞内合成。 (2)HO在亲代细胞里而不是子代细胞被转录。 (3)HO的转录也与细胞周期相关,该基因只在亲代细胞G1期末表达。 第五节 酵母菌的载体系统 酵母菌的载体种类很多，根据其功能可分为三大类:克隆载体、表达载体及分泌载体。通过醋酸锂的方法很容易将外源质粒导入到酿酒酵母细胞中。 一、克隆载体 克隆载体用于基因克隆, 依据酵母菌质粒载体的构成和复制方式, 而分为整合型载体(YIp)、附加体载体(YEp)、复制载体(YRp)、着丝粒载体(YCp)和酵母的人工染色体(YAC)五类 (表 )。 1. 酵母整合型载体(YIp) 这类载体只含有大肠杆菌的复制起点, 不能在酵母菌中自主复制。但可以与酵母染色体进行同源重组, 以低频率整合到酵母细胞染色体上。 整合位点数取决于载体中的互补基因序列数。通常以单拷贝存在, 少数发生多位点整合。 大部分YIp质粒含酵母菌选择标记(如HIS3、LEU2、URA3等)。这种质粒的转化子很稳定,可在无选择条件下培养很多代而不丢失,但其转化率很低(图7-23)。 2. 酵母附加体质粒载体(YEp) 这类载体属于自主复制型质粒，除含有酿酒酵母2μm的复制起点(2μm ori)和酵母选择标记如URA3(尿嘧啶)外，还含有细菌的复制起点(ori)和抗性选择标记基因(如Ampr)。 YEp载体的拷贝数多(50～100)、稳定性好,是酵母遗传工程中应用最广泛的载体系统,常用于酵母菌中的一般基因克隆和基因表达的研究(图7-23)。 3.酵母菌复制载体(YRp) YRp含有酵母自主复制序列(ARS),可作为染色体外因子复制并保留下来。 这类载体转化率高,拷贝数也高,但在减数分裂和有丝分裂中不稳定而使群体内的拷贝数变化很大(图7-23)。 4. 酵母着丝粒载体(YCp) 这类载体除含酵母自主复制序列(ARS)外, 还含有酵母染色体的着丝粒(CEN), 因此能在染色体外自我复制。 在细胞分裂时新复制的质粒均等分离,每一个细胞得到1～3个质粒,故拷贝数很低,但很稳定。 由于YCp的高稳定性和低拷贝数,因此这类质粒适合作亚克隆载体和构建酵母基因组DNA文库,还可用于检测有丝分裂中染色体倍性变化和分析鉴定酵母基因突变等研究(图7-23)。 表 酿酒酵母克隆载体的特性 克隆载体 存在形式 自主复制区来源 选择标记 转化频率 质粒稳定性(丢失) 有丝分裂 减数分裂 15-20代 YIp 整合型 无 upa3 10-6 0-1% 1% (YIp5) 1-几个拷贝 Apr Tetr ? YEp ARS (YEp13) 多拷贝 2μm leu2 10-3-10-4 10-25% (60-100) Apr Tetr? YRp ARS (YRp7) 多拷贝 染色体 trp1 10-3-10-4 30% (30±) Apr Tetr ? YCp CEN ARS,CEN trp1 ura3 10-3-10-4 3%