谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase ,GST)活性测定试剂盒使用说明.pdfVIP

谷胱甘肽S-转移酶 （glutathione S-transferase，GST）活性测定试剂盒使用说明 货号：SN101 规格：50 管/48 样 产品简介： 谷胱甘肽 S-转硫酶 （GST）是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质 内。GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱 甘肽巯基的共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内 各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合 物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-SeGSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。 GST 催化 GSH 与 CDNB 结合，其结合产物的光吸收峰波长为 340nm，通过测定 340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出 GST 活性。 试验中所需的仪器和试剂： 紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml 石英比色皿、双蒸 水 产品内容： 试剂一：试剂一×1 支，用前充分溶解于 100ml 双蒸水中，4℃保存 3 个月 试剂二：粉剂二×1 支；稀释液二×1 管，用前将稀释液二加入粉剂二中充分溶解后加 双蒸水至 5.0ml，4℃保存 3 个月 试剂三：粉剂三×1 支，4℃保存 3 个月，临用前加试剂一 5.0ml 充分溶解，临用前 配制。 操作步骤： 一、样品测定的准备： 称约 0.1g 组织，加入 1ml 试剂一，冰上充分研磨，10000rpm 4℃离心 10min，取上 清(如上清不清澈，再离心3min)。 二、GST 测定操作 1、 混合试剂配制：将试剂二与试剂一按 1：8 混合 2、 试剂三放在 25℃预温 3、 分光光度计调到 340nm 处，设定时间为 5min，用双蒸水调零 4、 取 0.1ml 样品与 0.9ml 混合液混合，于 25℃预温 5min，再加入试剂三 0.1ml， 迅速混匀，于 340nm 处测定 5min 内吸光值的变化,第 0s 的吸光值记为 A1，第 300s 的 吸光值记为 A2 5、 空白管测定为操作 4 中以0.1ml 试剂一代替0.1ml 样品液 酶活计算： 一、 血液 GST 活性计算 1、 GST 活力单位定义：在25℃下，每ml 血液每分钟催化 1 μmol/L CDNB 与GSH 结 合的GST 酶量为U。 2、 计算公式： 6 6 GST （U/ml）= ΔA 340 /min× 〔10 / ( ε·d) 〕× （V 总/V 样）= ΔA /min×10 / (9.6× 3 10 ×1) 〕×1.1/0.1= ΔA340 /min×1145.83 △A340 =△A 测定管 -△A 空白管 ，△A 测定管 与△A 空白管 均等于 （A2-A1）/5，即每分钟吸光 值变化3 mol/L • cm 3 ε：产物在 340nm 处摩尔吸光系数为9.6×10 mol/L • cm 10 6 ：摩尔分子换算成微摩尔分子 d ：比色杯光径 （cm） V 总：反应总体积 （ml） V 样：所用样品体积 （ml） 二、 组织 GST 活性计算 1、 GST 活力单位定义：在25℃下，每毫克蛋白每分钟催化1 μmol/L CDNB 与GSH 结 合的GST 酶量为1U。 2、 计算公式： 6