MALDI样品制备方法.pdf

MALDI-TOF的样品制备 样品制备 基质选择 样品净化 样品制备的一般顺序： 选择基质 制备基质溶液 制备样品溶液 混匀基质和样品 点靶 放干 理想的样品浓度 样品类型 理想浓度 0.1 - 10 pmol/µl 多肽和蛋白质 (糖蛋白 10 pmol/µl) 核酸 10 -100 pmol/µl 多聚物 100 pmol/µl 注: 1 pmol/ul = 10-6 M 常见的样品制备方法 干燥液滴法 真空干燥法 压碎结晶法 快速蒸发法 双层法 夹心法 电喷雾法 快速点样法 预点基质法 先点样品法 压片法 干燥液滴法 操作步骤： • 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液 • 离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中 • 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀 • 吸取0.5-2 uL 点靶 • 室温自然干燥 本法最为常用，适用于大多数情况。 干燥液滴法的优缺点 优点 1. 方法简单，适用于很多种样品 2. 具有较好的耐盐性 3. 适用于混合物 4. 可以洗去表面的不挥发性盐份 缺点 1. 使用某些基质（如2,5-dihydroxybenzoic acid ）时， 结晶不均匀，容易长在液滴的外环边上。 2. 有些组份与基质不能形成共结晶。 真空干燥法 操作步骤： • 在适当的溶剂中配制新鲜的饱和基质溶液 • 离心,吸取5-10 uL 基质溶液上清,加到小离心管中 • 加入1-2 uL样品溶液(1-100 mM) ，涡旋混匀 • 吸取0.5-2 uL 点靶 • 把靶放入真空干燥器内，抽真空到10-2 Torr 以下，使溶液快 速干燥 注：本法是干燥液滴法的一种变体。 真空干燥法的优缺点 优点 减小结晶颗粒的大小 提高结晶的均匀程度 提高质量准确度和分辨率 缺点 效果不总是好于干燥液滴法 需要额外的真空泵 碱金属离子加合峰较强 压碎结晶法