SOP-TQ-012-01变性琼脂糖凝胶电泳RNA检测操作规程.PDFVIP

最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 最佳实践规范及标准操作流程 文件汇编 （第二版） 2010年5月 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 上海生物样本库 质量管理体系文件 文件名称 变性琼脂糖凝胶电泳RNA检测操作规 编号 SOP-TQ-012-01 程 批 准 人 批准日期 实施日期 变性琼脂糖凝胶电泳 RNA 检测操作规程 1.目的 规定了变性琼脂糖凝胶电泳RNA检测的操作。 2.适用范围 适用于从人体体液、细胞、组织等样本中提取和纯化的RNA样本的使用变性 琼脂糖凝胶电泳的检测。 3.定义和术语 3.1 核糖核酸 ribonucleic acid，RNA 由脱氧核糖核酸（DNA）为模板转录合成的核糖核酸的片断。 4.职责 4.1 样本库实验人员负责变性琼脂糖凝胶电泳的RNA检测工作。 5.设备和器材 5.1 微波炉、水平电泳仪 5.2 DECP水 在2L双蒸水中加入1mlDECP，37℃孵育过夜，蒸压两次烧尽DECP。 5.3 10X MOPS缓冲液（pH 7.0） 0.4M MOPS, 0.1M 醋酸纳，0.01M EDTA，用氢氧化钠调节至pH7.0后室温贮 存。 5.4 100ul上样缓冲液 48ul甲酰胺, 17.3 ul 37%甲醛（12.3M），34.7ul上样染液 5.5 上样染液 1 最佳实践规范及标准操作流程文件汇编 V2.01 80ul 10X MOPS缓冲液 50ul DECP水 50ul 溴化乙锭 40ul 无菌甘油 40ul DECP溶解的饱和溴酚蓝 4℃避光贮存。 6.正文 6.1 检测原理 6.1.1 评价 RNA 质量的标准是 RNA 的均一性和完整性。RNA 的完整性可通过 变性琼脂糖凝胶电泳进行鉴定。完整的 RNA 电泳时，28S（约 4.8kb）和 18S（约 1.9kb）rRNA经EB染色后，两条电泳带的显色强度近似比为2比1。 6.2 检测步骤 6.2.1 配制1%变性琼脂糖凝胶 A. 在0.1% DEPC水中加入琼脂糖后微波加热2分钟，使溶解； B. 冷却至60℃左右加入37%甲醛和10X MOPS C. 将凝胶倒入灌胶槽，等待约1小时凝固胶。 D. 配制表 溶液体积（ml） 50 100 200 琼脂糖（g） 0.5 1 2 DECP水（ml） 36 72 144 10X MOPS缓冲液（ml） 5 10 20 37%甲醛（ml） 9 18 36 6.2.2样品的处理 A. 将1-5ug RNA稀释到约3ul。 B. 在 RNA 样品中加入 5-10ul 上样缓冲液。加入溴化乙锭使终浓度