分子生物学复习纲要(期末).pdf

分子生物学：在分子水平，研究生命现象的科学。核心内容：通过研究生物的物质基础来阐明生物的物质基础。 第一章 1928 年Griffith 肺炎球菌转化实验1943 年Avery 完成体外转化实验1952 年Hershey Chase 噬菌体转导实验证明 DNA 是遗传物质。 DNA 的结构 DNA 的一级结构是由4 种脱氧核糖核苷酸即：腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶脱氧核苷酸，通过3’，5’，— 磷酸二酯键连接起来的直线形或环形多聚体。 DNA 的二级结构就是指两条脱氧核苷酸链以反向平行的形式，围绕同一个中心轴盘绕排列所形成的双螺旋结构。 1. 双螺旋是动态的平衡，结构改变以适应行使不同的功能。 2. B-DNA 是活性最高的DNA 构象，B 型（10.4bp）变成A 型（11bp）仍有活性，但变成Z 型，活性明显降低。 DNA 三级结构是指DNA 分子通过扭曲和折叠所形成的特定构象。包括不同二级结构单元间的相互作用、单链与 二级结构单元间的相互作用及DNA 的拓扑结构。 超螺旋是三级结构的一种形式，是双螺旋的螺旋。超螺旋具有方向性，即正超螺旋和负超螺旋。 拓扑异构酶 1，切断一条链，无需能量，松弛。拓扑异构酶2，切断2 条链，需ATP，超螺旋化。 三链DNA 是指DNA 分子中的单链与双链相互作用而形成的三链结构——Hoogsteen 配对 RNA 结构 一级结构：RNA contains ribose and uracil and is usually single-stranded 二级结构：局部双链 三级结构：单链、环状结构和双螺旋之间的相互作用形成RNA 的高级结构。 rRNA 细菌rRNA 有5S、16S、23S 三种； 哺乳动物rRNA 有5S、5.8S、18S、28S 四种 核酶：有催化活性，能够催化特定化学反应的RNA。 核内不均一RNA：真核细胞mRNA 的原始转录物是分子量极大的前体，在核内加工过程中形成的分子量大小不等 的中间产物。 ORF，开放阅读框：mRNA 分子上从起始密码子AUG 到终止密码子这一段连续的核苷酸序列，即编码区。 核酸的变性 （denaturation）是指核酸双螺旋氢键的断裂，变成单键并不涉及共价键的断裂。 将DNA 双螺旋失去一半时的温度称为该DNA 的Tm （melting temperature） 核酸的复性（renaturation）：变性DNA 在适当的条件下又可使两条彼此分开的链自发重新缔合成为双螺旋结构的 过程称为核酸的复性。 杂交分子 ：已经复性的DNA 分子如果两条链来源不同 核酸的杂交 （hybridization ）序列互补的单链RNA 和DNA，或DNA 和DNA，或RNA 和RNA，根据碱基互 补的原则，借助氢键相连而形成双链杂交分子的过程. 探针probe: 是一段可以与靶核酸序列特异结合发生相互作用的核酸序列，经过标记后可以用来检测出靶核酸序 列. Southern blot DNA 印迹方法，Northern blot RNA 印迹方法，Western blot 蛋白质印迹方法 生物芯片：将数以万计的生物大分子探针分别固定在微小载体表面而制成的芯片。目前有蛋白质芯片和核酸芯片 两类。 核酸芯片是指将大量探针以很的高密度分子固定于支持物上，然后与标记的核酸样品进行杂交，通过检测杂交 信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量，也可还可以用于核酸样品的序列分析。 反义核酸是根据碱基互补的原理,利用人工合成或细胞中天然存在的DNA 或RNA 片段(或其化学修饰的衍生物)与 靶序列核酸结合，通过空间位阻作用或诱导RNAase 活性的降解作用，在复制、转录、剪接、mRNA 转运及翻 译等水平上，抑制或封闭目的靶基因的表达。 主要取决于其稳定性、生物利用度以及与靶基因结合或反应的特性。 反义技术是利用人工合成或细胞中天然存在的DNA 或RNA 片段(或其衍生物)与特定的基因相互作用,从而抑制基 因的表达。 肽核酸（PNA）：在特定肽链上连接不同碱基，以类氨基多肽链代替核酸中核糖磷酸骨架，并按一定顺序结合上碱 基所形成的肽核酸，能与互补的DNA 或RNA 结合。 MicroRNAs (miRNAs)是一种大小约21—25 个碱基的单链小分子RNA，是由具有发夹结构的约70-90 个碱基 大小的单链RNA 前体经过Dicer 酶加工后生成。不完全互补结合到目标靶mRNA 3‘非编码区端 第二章 染色质和染色体属于同一物质，只是因细胞所处时期不同和生理功能不同而表现出形态差异，细胞分裂间期—染 色质(chromatin)，分裂期—染色体(chromos