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IQTL 7.0简易操作指南 1D Gel Analysis ************************************************************ # 点击【1D gel analysis】，点击【OPEN】打开图像； # 在【一维凝胶分析】中，一共可分为5个步骤，它们分别是创建泳道【Lane Creation】、消减背景【Background Subtraction】、蛋白条带检测【Band Detection】、分子量计算【Molecular Size Calibration】以及含量校正【Quantity Calibration】或者含量归一化【Normalisation】； # 在图像分析之前，首先需要对图像进行一些调整，去除无需分析的凝胶部分如上样孔和边缘，对图像进行旋转、调节图像对比度等。点击【常用工具栏】上的【Edit Image】图标，进入图像编辑界面。【Invert display】从而使图像变为【反色】效果（即黑变白、白变黑效果），从而增加图像的反差。 自动分析 #只要点击左侧的【Automatic】按钮，程序便自动完成三步的分析：【创建泳道】、【消减背景】以及【蛋白条带检测】； #自动分析完成后，程序的左侧便自动的切换至【快速分析工具栏】；可以对每个步骤进行更详细的调整和修改； 手动分析 #【Stepwise】进入手动分析步骤，首先是【创建泳道】。选择【Automatic】模式并点击【Create】按钮，程序会自动创建出合适数量的泳道，点击【Accept】接受该结果，点击【Clear】可以清楚创建泳道的结果；如果选择【Manual】模式，可以在【导航箭头】下面的【Parameters】中设置相关的参数，如泳道数量【Number of Lanes】等，在图像上拖动鼠标就可以按照设置创建出所需的泳道； # 如果需要对已经创建的泳道进行调整，可以在【编辑模式】下来框中选择【Edit Multiple Lanes】或者【Edit Single Lanes】进行调整； # 选择【Edit Single Lanes】，点击【Bend/Resize】可以调整泳道宽窄；同时，如果电泳泳道弯曲，我们可以在电泳泳道上点击【鼠标左键】为泳道增加一个或多个弯曲节点，拖动该节点可以弯曲【泳道检测线】使之符合实际泳道的形状；如果设定的节点不合适，也可以通过【右键】单击该节点进行删除； # 点击【Move】并拖动泳道移动该泳道；选择【Add Grimaces】可以调整泳道的弯曲效果；调整完毕后，点击【Accept】对接受所做的修改； ************************************************************* # 完成创建泳道后，点击【导航栏】上的【Next】按钮进入到【消减背景】步骤； # 在【Image Window】中，选中的泳道显示为绿色，同时在右侧的【Lane】泳道窗口中可以看到以实线表示的该泳道的峰形图，峰型图下的紫色实线为背景基线，在此背景基线之下的部分都被程序认为是背景； # 在【导航栏】下面的【Parameters】中有多种背景消减的算法，其中在99% 以上的情况下，我们都使用【Rolling Ball】滚球算法作为背景消减的方法； # 选中【Rolling Ball】，可以通过上面的滑动块调节滚球的半径【Radius】使背景基线（紫色实线）能够尽可能的与背景重合，不同的图像设置的【Radius】的值有所不同。点击【Subtract】按钮就完成了对图像背景的消减操作； # 【Minimum Profile】方法是以峰形图灰度最低值做一条平行于底边的实线作为背景值；【Image Rectangle】方法是在图像上选择一定区域并以该区域中像素灰度的平均值作为背景值，这一方法要求图像背景灰度分布均一；【Manual Baseline】是通过手动调节背景基线，这些方法都不能保证条带比较时的平行性，因此，一般情况下不建议使用； # 进行完【消减背景】操作后，点击【Next】进入下一步【条带检测】。 ************************************************************* # 在【条带检测】步骤中，点击【Detect】进行自动条带检测。 滑动【Minimum slope】下的滑动块，可以调节条带检测的最小斜率。该值越小，检测到的条带数量越多；反之，该值越大，检测到的条带数量越少； # 还可以通过【Parameters】中的参数对条带检测做一些精细的调节，包括噪音消减【Noise reduction】及最高峰百分比【%Max.Peak】。改变【Noise reduction】的数值可以调整噪音的阈值，