川芎嗪对癫痫作用及其及白细胞介素1受体关系探究.docVIP

川芎嗪对癫痫作用及其及白细胞介素1受体关系探究 　 作者：朱晓琴 雷水生 张端莲 【摘要】 　　目的: 研究川芎嗪对癫痫的作用及其与白细胞介素1受体( IL1R)的关系。方法:用腹腔注射戊四氮制作大鼠癫痫模型,致痫前后分组分别给予川芎嗪,观察大鼠出现癫痫发作的潜伏期及持续时间,并用脑电图仪和免疫细胞化学方法研究川芎嗪对癫痫大鼠脑电图和皮层及海马区IL1Rβ免疫反应阳性细胞的影响。结果:对照组无癫痫发作。致痫前给予川芎嗪组大鼠较癫痫组大鼠癫痫发作潜伏期延长,持续时间缩短，差异有显著意义(Plt;0.01) ；脑电图高电位痫样波发放减少,大脑皮层和海马IL1Rβ免疫反应阳性细胞数减少，差异有显著意义(Plt;0.01) ；致痫后给予川芎嗪组,上述指标与癫痫组相比,差异无显著意义（Pgt;0.05) 。结论: 川芎嗪抑制癫痫发作，其作用机制与通过白细胞介素1对免疫神经的调节有关。 【关键词】 川芎嗪 癫痫 白细胞介素1受体；戊四氮 　　川芎嗪(Chuangxingzine Ligust razine) 是伞形科植物川芎根茎中的主要化学成分之一,化学名为四甲基吡嗪,是从伞型草本科植物中提取的一种生物碱单体。在体内吸收后,能有效地透过血脑屏障,并广泛分布大脑皮层、脑干、纹状体、海马、小脑和中脑等部位。笔者以往研究证明［1～4］ ：IL1能诱发大鼠癫痫发作行为，川芎嗪能抑制大鼠癫痫模型的痫样放电，对大鼠癫痫模型神经细胞的损伤具有保护。本研究旨在探讨川芎嗪是否通过IL1对免疫、神经的调节而影响神经系统的兴奋性，从而为川芎嗪治疗癫痫提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 药品及试剂 川芎嗪注射液40 mg/ 2 mL (北京第四制药有限公司生产，批；IL1Rβ检测试剂盒(HistostainTMPlus kits)（北京宝赛生物技术有限公司）。 　　1.2 动物分组及模型制备 采用健康雄性Wistar大鼠30只（广州医学院动物中心提供）,体重200～250g,其中12 只按45mg/kg 腹腔注射戊巴比妥钠麻醉后, 固定于大鼠脑立体定向仪上,在双侧皮层和海马放置针电极。放养恢复1周后,随机分配到以下4 组,每组3 只。①对照组:取未埋电极的Wistar 大鼠3只,连同放置针电极大鼠3只,腹腔注射0.9%氯化钠注射液2ml 。其中放置针电极的3只进行脑电图描记,45min 后,按45 mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠麻醉取脑。②癫痫组:取Wistar大鼠5只,连同放置针电极大鼠3只,按4mg/kg腹腔注射戊四氮致痫,记录癫痫发作潜伏期及发作程度和发作的持续时间。其中3只进行脑电图描记, 45min后,按45mg/kg 腹腔注射戊巴比妥钠麻醉取脑。③致痫前给予川芎嗪组:取Wistar大鼠5只,连同放置针电极大鼠3只,按40mg/kg 腹腔注射川芎嗪［5］ ,30min后按4mg/kg 腹腔注射戊四氮致痫,记录癫痫发作潜伏期及发作程度和持续时间。其中3只进行脑电图描记，45min后,按45mg/kg 腹腔注射戊巴比妥钠腹腔麻醉取脑。④致痫后给予川芎嗪组:取Wistar大鼠5只,连同放置针电极大鼠3只,按4mg/kg腹腔注射戊四氮致痫,记录癫痫发作潜伏期及发作程度和持续时间。其中3只行脑电图描记，45min后,按40mg/kg 腹腔注射川芎嗪,30min后,按45mg/kg腹腔注射戊巴比妥钠麻醉取脑。 　　1.3 行为学表现 根据Diehl［6］的评估标准，将大鼠的癫痫发作程度由轻到重分为0～Ⅴ级。0级:无反应; I 级:节律性嘴和面部抽动; Ⅱ级:点头或甩尾; Ⅲ级:单肢抽动; Ⅳ级:多肢抽动或强直; Ⅴ级:全面性强直阵挛发作。 　　1.4 脑电图描记 在双侧大脑皮层(顶区) 、海马放置针电极。电极定位:大脑皮层:前囟前2mm ,中线旁2mm ,硬膜下0.5mm；海马:前囟后3.8mm ,旁开2mm ,硬膜下3.6mm。全部电极用牙托粉加502胶固定。电极左皮层(LP) 、右皮层(RP) 、左海马(LH) 、右海马(RH)依次分别与参考电极组成4 个导联描记。参考电极置于鼻尖利用A1+A2 导线。定标2mm=50μV。行脑电图描记时,大鼠处于浅麻醉状态。 　　1.5 实验步骤 ①动物经用0.3%戊巴比妥钠(45mg/kg) 腹腔注射麻醉,断头取脑，修块到冠状位上最大海马层面,HE染色确证; ②冰冻切片厚6μm 冷丙酮固定20 min 后吹干; ③按试剂盒说明书进行。其中一抗兔抗大鼠IL1RβIgG(1∶20) ,4 ℃过夜;二抗生物素化羊抗兔IgG(1∶100) ,37 ℃下置45min。 　　1.6 IL1R 免疫反应阳性细胞观察 取每只大鼠各2张切片,用20倍显微镜观察所有切片中的