涤痰化瘀法对高血压左心室肥厚模型大鼠心肌细胞凋亡影响.docVIP

涤痰化瘀法对高血压左心室肥厚模型大鼠心肌细胞凋亡影响 　 作者：陈茹琴 熊平 周欣欣 梁兆球 吴良芝 【摘要】; 【目的】观察涤痰化痰法对高血压左心室肥厚模型大鼠心肌细胞凋亡的影响。【方法】选用SPF级SD大鼠62只，随机分为5组：正常对照组，假手术组，中药低、高剂量组（分别按8.5、19.0g·kg-1·d-1剂量灌服涤痰化瘀方煎液）；后3组均采用二肾二夹法复制高血压模型，手术35d后各组按设计剂量连续给药60d；观察各组血压、左室质量及全心质量，检测各组大鼠左心室质量指数（wLV），观察各组大鼠心肌病理形态变化，并采用流式细胞术检测各组心肌细胞凋亡率。【结果】中药低、高剂量组虽可降低血压、左室质量及全心质量，但与模型组比较无显著性差异（P＞0.05）；两中药组均可显著性降低左心室质量指数和心肌细胞凋亡率（P＜0.05或P＜0.01），改善心肌组织的病理变化，防止心肌坏死和纤维化。【结论】涤痰化瘀法对高血压的治疗作用可能与其能减少心肌细胞凋亡，逆转左心室重构，减少心肌坏死及纤维化有关。 【关键词】; 高血压/中药疗法； 涤痰化瘀法/治疗作用； 心肌/病理学； 细胞凋亡； 疾病模型，动物； 大鼠 左心室肥厚(LVH)多见于高血压病的中晚期，可能是心脏对高血压的持续性负荷发生的一种慢性适应性过程，其发生机制目前尚未完全阐明。近年研究表明：高血压病的主要靶器官(心、脑、肾)中均存在细胞凋亡现象［1-4］，抗高血压药物如血管紧张素转换酶抑制剂、钙通道阻滞剂等则能影响机体靶器官的细胞凋亡［5-6］。中医学认为，LVH病机属本虚标实，本虚则气血运行不畅致气滞血瘀，水液不能正常敷布致痰浊阻络，同时，气滞血瘀和痰浊阻络可互为因果［7-8］。本研究观察了涤痰化瘀法对肾血管性高血压模型大鼠左心室重构、病理改变及心肌细胞凋亡的影响。现报道如下。 ; 1; 材料与方法 ; 1.1仪器及试剂; Epics XL流式细胞仪(美国Beckman Coulte)；多参数细胞周期分析软件(MultiCycle Software，美国Coulter公司)；DNA Prep Kit(Beckman Coulter 公司)；胶原酶、胰酶、乙二胺四乙酸（EDTA）均购自Sigma公司；TP1020生物组织脱水机、EG1140石蜡包埋机、RM2135 轮转式石蜡切片机均由德国Leica公司生产；CSIV型摊片烤片机（孝感市电子仪器厂）；CX41OLYMPUS图像分析系统（日本OLYMPUS公司）；RBP1B型大鼠血压计(中日友好临床医学研究所研制)。 ; 1.2中药及制备; 涤痰化瘀方组成为陈皮9g、橘红9g、、法半夏9g、瓜蒌9g、枳壳9g、赤芍10g、川芎10g、丹参20g、桃仁5g、红花10g、枸杞15g、杜仲10g、炙甘草3g，由广州致信中药饮片有限公司提供。加蒸馏水适量煎煮2次，每次煮沸30min，合并滤出液，浓缩，密封，高温高压灭菌，4℃存放备用。 ; 1.3; 动物与分组; SD雄性SPF级大鼠62只，体质量（80±10）g，由广东省医学实验动物中心提供，合格证：SCXK（粤）2003粤监证字2006A015。动物随机分为5组，分别为正常对照组8只，假手术组10只，高血压模型组14只，中药低、高剂量组各15只。各组大鼠适应饲养3d后测血压、体质量，除假手术组和正常对照组外，其他各组均采用二肾二夹法复制高血压模型。手术35d后，中药低、高剂量组均灌胃给予涤痰化瘀方煎液，剂量分别为8.5、19.0g.kg-1.d-1，其他组给予等容积生理盐水，给药60d后，处死大鼠取材。 ; 1.4; 高血压大鼠模型的复制［9］; 术前给大鼠称体质量、测血压，用100g /L水合氯醛（3.5mL/kg）腹腔麻醉，仰卧位固定，剪去腹部手术野毛发，皮肤消毒后于剑突下1cm沿腹正中线切开皮肤及肌层，切口约1.5cm，切口两边铺放浸过生理盐水的纱布，钝性分离双侧肾动脉，用镊子取0.3mm的U型银夹将其垂直套入，待肾动脉落入银夹顶部的小孔内，用镊子锁闭银夹造成狭窄，手术避免损伤肾脏、肝脏、乳糜池及肾静脉。判断肾动脉的方法：将其提起后肾脏颜色由红褐色变灰白色，则为肾动脉。手术完成后，向腹腔内注射2mL的庆大霉素注射液，缝合肌肉与皮肤创口，连续3d常规肌注5U青霉素。术后血压大于术前的3个标准差且高于15.3kPa，则确定模型成立。假手术组游离肾动脉，不套银夹，正常对照组不手术。 ; 1.5; 大鼠血压(SBP)的测量; 采用尾袖法，每周测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压。 ; 1.6; 检测指标; ; 1.6.1; 左心室肥厚的主要指标; 实验结束，将禁食12h的大鼠称体质量(mbody)，用100g/L的水合氯醛行腹腔注射，麻醉后开胸取出心脏，迅速置于4℃预