环氧化酶2抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡影响.docVIP

环氧化酶2抑制剂联合依托泊苷对肺癌细胞增殖凋亡影响 　 作者：邢丽华,刘剑波　张惠兰 ，张珍祥 【摘要】 目的 探讨环氧化酶2(COX2)抑制剂尼米舒利(NIM)与化疗药依托泊苷(VP16)联用对肺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 培养人肺癌细胞A549：①NIM（25μmol/L）与VP16（2～32μg/mL）联合，MTT试验观察干预48h后细胞增殖变化及增殖抑制率；②分为对照组、NIM 组（25μmol/L）、VP16组（8μg/mL）和NIM +VP16组，观察12h、24h及48h后A549细胞生长情况，描记生长曲线；流式细胞术检测干预48h后细胞凋亡率。结果 ①VP16能抑制肺癌A549细胞的增殖，且呈量效关系（r=-0.908,Plt;0.01），NIM与VP16联用后，抑增殖作用增强，二者有相加或协同作用；②NIM及VP16均可抑制A549细胞的生长，诱导凋亡，二者联用后作用增强。结论 NIM与VP16联用可增强对肺癌细胞增殖的抑制和凋亡的诱导，二者具有协同抗肿瘤作用。 【关键词】 肺癌；凋亡；增殖；环氧化酶2；依托泊苷 The Effects of Nimesulide Combined with Etoposide on Lung Cancer Cell Proliferation and Apoptosis Key words：Lung neoplasm; Apoptosis; Proliferation; Cyclooxygenase 2; Etoposide 近20 年来，肺癌已成为世界范围内发病率及病死率最高的恶性肿瘤，严重威胁着人类的健康和生命。目前由于早期诊断技术的局限，约75%～80%患者就诊时已属晚期，有效的综合治疗尤其是提高全身化疗疗效十分必要。环氧化酶2（cyclooxygenase 2，COX2）是前列腺素（prostaglandins，PGs）生物合成过程中一个重要的限速酶，与肿瘤发生发展关系密切，而COX2抑制剂可增强一些肿瘤细胞对化疗药物的敏感性 [1]。本研究拟探讨COX2抑制剂尼米舒利 (nimesulide, NIM)与肺癌常用化疗药依托泊苷（etoposide, VP16）联用对肺癌细胞增殖与凋亡的作用，以期为肺癌的临床治疗提供基础理论依据。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 人肺癌细胞株A549（购自武汉大学典型生物冷藏中心），用含10%新生牛血清（武汉三利生物制品厂）、100u/mL青霉素及100u/mL链霉素的RPMI1640培养基（Gibco公司），于37℃、5%CO2培养箱内培养，细胞为贴壁生长，0.25%胰蛋白酶（Gibco公司）消化传代。 1.2 MTT比色法检测A549细胞增殖及增殖抑制率 取对数生长期A549细胞按1×104/孔接种于96孔培养板，每孔加液量200μL。24h后换液，设空白调零组：不接种细胞；对照组：只含等量溶剂；实验组：NIM（Sigma公司）25μmol/L与VP16（山东齐鲁制药厂）2～32μg/mL联用，每组设6个复孔。培养48h后加入MTT（5mg/mL）20μL, 继续培养4h后吸出培养液，每孔加DMSO 150μL，振荡溶解10min，待结晶完全溶解后，在ELX800酶标仪（美国BioTek公司）上选择波长490nm，空白组调零，测定各孔吸光度A，计算细胞生长抑制率。抑制率＝（1－实验组A平均值/对照组A平均值）×100%。按以下公式计算Q值并判断两药的联合效应［2］：Q=E(A+B)/[EA+(1EA)EB]，其中E(A+B)为两药合用的抑制率，EA、EB为两药单用的抑制率。Q=0.85～1.15表示两药作用相加；Qgt;1.15表示两药作用协同；Qlt;0.85表示两药作用相互拮抗。 1.3 描绘细胞生长曲线 取对数生长期A549细胞按2×105 /mL接种于六孔板，24h后换液，分为4组，即对照组：未加药物；NIM组：NIM 25μmol/L；VP16组：VP16 8μg/mL；NIM + VP16组 ：NIM 25μmol/L+ VP16 8μg/mL。分别于干预后12h、24h、48h各取4孔，每孔4次记数，取其平均值，描绘生长曲线。 1.4 流式细胞术检测细胞凋亡率 取对数生长期A549细胞2×105/mL接种于培养瓶中，24h后换液，分组同1.3，各组均重复3瓶。培养48h后常规收集细胞，70%冷乙醇固定，-20℃保存。检测前PBS洗两次，RNA酶消化，PI避光染色30min，上流式细胞仪检测凋亡率。 1.5 统计学处理 计量资料用±s表示，SPSS11.0统计软件行单因素方差分析。 2 结果 2.1 细胞增殖抑制率 MTT比色