罗勒胶囊抑制肿瘤血道自发性转移实验探究-.docVIP

罗勒胶囊抑制肿瘤血道自发性转移实验探究* 　 作者：张丹，郑广娟，张静，夏丽英，聂克 【摘要】 目的 观察罗勒胶囊对肿瘤血道自发性转移的抑制作用。方法 选用小鼠子宫颈癌U14脾内移植后自发性肝转移模型，切取肝、脾、肺、肾等器官及腹腔内部淋巴结（包括幽门、肾门处淋巴结），组织学观察并进行肝转移程度的组织学分级；选用Lewis肺癌自发性转移模型，计数肺转移结节数并作病理组织切片观察。结果 罗勒胶囊大、中、小剂量组对小鼠子宫颈癌U14脾种植肝转移模型，均可使肝内转移结节数明显少于阴性对照组；对Lewis肺癌自发性转移模型，均可使肺转移结节数明显少于阴性对照组，并使转移率下降。结论 罗勒胶囊可抑制肿瘤血道自发性转移。 【关键词】 罗勒胶囊；血道转移；自发性转移；实验研究 肿瘤侵袭是指恶性肿瘤细胞离开原发生部位，突破基底膜和细胞外基质构成的屏障，侵犯毗邻的正常组织。而转移即恶性肿瘤细胞借助血道、淋巴道等途径，在远离肿瘤原发生长部位的器官内形成继发瘤的过程［1］。肿瘤侵袭及转移是肿瘤患者治疗失败的主要原因。为了能彻底治愈癌症，控制肿瘤侵袭和转移是关键。目前虽有一些抗肿瘤侵袭和转移的药物在临床上应用，但效果不理想。为此，寻找抗肿瘤侵袭和转移药物是当务之急，特别是寻找高效、低毒的天然产物更具有实用价值。罗勒胶囊是从植物罗勒（Ocimum basilicum Lim）中提取而制成的天然的抗肿瘤转移的药物。本文将其抑制肿瘤血道自发性转移的实验研究介绍如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 动物 昆明种小鼠体重，体重18～22g，由山东大学西校区实验动物中心提供，合格证号200001002；C57BL/6小鼠，体重18～22g，由中国医学科学院动物实验中心提供，合格证号SCXK11-00-0006。 1.1.2 瘤株 Lewis肺癌瘤株小鼠，子宫颈癌U14腹水型小鼠均由中国医学科学院动物实验中心提供。 1.2 方法 1.2.1 对小鼠子宫颈癌U14脾内移植后自发性肝转移模型的作用抽取U14腹水瘤，台盼兰排斥法计数活细胞数，用无血清的RPMI-1640培养液调整瘤细胞浓度为108/ml备用。用0.25%戊巴比妥钠0.4～0.6ml/只，腹腔注射麻醉小鼠，在小鼠的左侧腹部（脾区）消毒后，剪开约1cm的小口，暴露脾脏并固定，用4号针头在脾脏的一端包膜下缓慢地注入0.01ml癌细胞悬液，将脾脏退回腹腔内，缝合切口。24h后随机分组给药。第1组阴性对照组给阴性对照液灌胃0.3ml/只；第2组罗勒大剂量组（简称罗大组）；第3组罗勒中剂量组（简称罗中组）；第4组罗勒小剂量（简称罗小组），以上均为灌胃给药，用药14天，给药容量为0.3ml/20g；第5组阳性对照组，给丝裂霉素0.1mg/kg，于接种后第1、3、5天腹腔注射。末次用药60min后处死小鼠，切取肝、脾、肺、肾等器官及腹腔内部淋巴结（包括幽门、肾门处淋巴结），Bouin氏液固定，HE染色，组织学观察来确定各器官及淋巴结是否有U14癌的转移。肝转移程度的组织学分级标准为0级：无转移；1级：肝内有1～2个200～500μm的小转移灶；2级：肝内有3～5个小转移灶或1～2个200～1000μm的较大转移灶；3级：肝内存在广泛转移灶。以上试验重复3批，每批动物同一性别，结果用Mann Whitneg-Teet进行统计学处理。并统计转移率，转移率=转移动物数/组内动物数。 1.2.2 对Lewis肺癌自发性转移模型作用 从荷瘤小鼠上剥离并选取生长良好的瘤块，按瘤块（g）：生理盐水（ml）为1∶3的比例作匀浆，在C57BL/6小鼠腋窝下接种肿瘤匀浆液0.2ml/只，接种24h后随机分组，分组及给药方法同上，第21天颈椎脱臼处死动物，称小鼠体重、瘤重和肺重，肺Bouin氏液固定，解剖镜下计数肺部正、反面及肺叶间的转移瘤灶数，做病理组织切片观察，最后用Mann-Whitney U-teet的方法检验肺转移结节数的组间差异。以上实验共重复三批，每批动物同一性别。 2 结果 2.1 罗勒胶囊对小鼠子宫颈癌U14脾内移植后自发性肝转移模型的作用 2.1.1 三批实验结果 见表1。 2.1.2 肝、脾病理组织学检查结果 随机取第一批实验动物脾做常规石蜡切片，HE染色，目的是判断脾种植是否成功及观察肝转移情况，以上均在光镜下观察并拍照，结果如下： 阴性对照组（11只）：脾：各动物脾包膜下均见种植癌，且有广泛性坏死。肝：除5号肝外，其余肝组织包膜下及肝内均见转移性U14宫颈癌瘤灶，3号门静脉及10号肝内均见癌栓。罗勒胶囊大剂量组（12只）：脾：各动物脾包膜下及脾内均见种植癌，脾结构有的破坏。肝：3号、12号动物肝内或包膜下，可见转移性U1