针刺对乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受体及其信号传导干预作.docVIP

针刺对乳腺增生模型大鼠雌激素、雌激素受体及其信号传导干预作 　【摘要】 【目的】观察针刺对雌激素介导的乳腺增生模型大鼠的影响。【方法】选用SD雌性未孕大鼠，随机分为4组：正常组、模型组、针刺组(电针膻中、三阴交穴)、西药组(灌胃三苯氧胺05mg·kg-1·d-1);除正常组外，其他组均采用肌注己烯雌酚(剂量为05mg·kg-1·d-1)及黄体酮(剂量为4mg·kg-1·d-1)方法复制乳腺增生模型;造模成功后针刺组及西药组治疗30d，采集标本，检测各组大鼠体质量，第2对乳头高度，血清雌激素(E2)水平，雌激素受体(ER)、细胞外信号调节激酶(ERK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达及乳腺组织形态学变化。【结果】各组大鼠治疗前后体质量、治疗前乳头高度差异无显著性意义(均Pgt;005)，治疗后模型组乳头高度显著增加(P﹤001)，各治疗组可显著降低乳头高度(均P﹤005);模型组出现明显乳腺增生形态学改变，各治疗组可显著减少乳腺小叶腺泡数、腺泡腔直径及导管直径(均P﹤005或P﹤001);模型组大鼠血清E2水平，乳腺组织ER、ERK、eNOS蛋白表达阳性细胞数显著增加(均P﹤001)，各治疗组可显著降低上述指标(P﹤005或P﹤001)。【结论】针刺治疗乳腺增生的作用可能与其能调节雌激素信号转导通路，抑制雌激素的促乳腺增生效应有关。 【关键词】 乳腺增生/针灸疗法;　雌激素/血液;　乳腺/病理学;　信号转导通路;　疾病模型，动物;　大鼠 雌激素作为一种重要的女性激素，在乳腺的生理病理过程中有着十分重要的作用。乳腺增生具有明显的雌激素依赖性。雌激素能刺激乳腺组织增生，引起乳腺导管扩张和囊肿形成，是影响乳腺增生发生、发展及转归的重要因素[1-2]。雌激素通过靶组织中的雌激素受体发挥其生物学效应，在这一过程中雌激素信号转导机制起着关键性的作用[3]。本实验观察了针刺对雌激素介导的乳腺增生模型大鼠雌激素(E2)水平，雌激素受体(ER)、细胞外信号调节激酶(ERK)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。现报道如下。 　　1　材料与方法 　　11　 实验动物　选用清洁级SD雌性未孕健康大鼠40只，体质量220~240g，鼠龄3个月，由广州中医药大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号：SCXK(粤)20030001。饲养环境：广州中医药大学实验动物中心提供的清洁级动物实验房，动物实验设施使用编号：0005042。 　　12　药物和试剂与仪器　己烯雌酚注射液(广州明兴制药厂生产，批号：103149);黄体酮注射液(上海通用药业股份有限公司生产，批号：;三苯氧胺(TAM，上海华联制药有限公司生产，批号：;苏木素(广州化学试剂厂生产，批号;伊红(南京化学试剂厂生产，批号;E2试剂盒由北京东雅生物技术有限公司提供(批号，检测仪器为上海日环仪器一厂SN695B型放免测量仪;ER、ERK、eNOS抗体及免疫组化试剂盒购自中山生物试剂有限公司广州分公司，ER、ERK、eNOS一抗工作浓度为1∶100;二抗、三抗、联苯二胺(DAB)工作液购自武汉博士德公司;日本Olympus显微镜;北京航空航天大学图像分析软件(24版本)。 　　13　造模方法[4]　 大鼠大腿内侧肌注己烯雌酚注射液 05mg·kg-1·d-1，连续25d，继而改用肌注黄体酮4mg·kg-1·d-1，连续5d。 　　14　分组　40只大鼠随机选取10只作为正常组，其他30只造模成功后随机分为模型组、针刺组和西药组。正常组在实验的后半段以蒸馏水灌胃2mL/d;模型组造模成功后以蒸馏水灌胃，针刺组造模成功后进行针刺治疗，西药组造模成功后灌胃三苯氧胺 05mg·kg-1·d-1，均30d。 　　15　针刺方法　取穴：膻中、三阴交穴。参照《实验针灸学》[5]，膻中定位：胸骨正中线上平第4~5肋间隙;三阴交定位：后肢内踝尖直上10mm处。刺法：以1寸毫针，斜刺膻中穴，留针15min;直刺双侧三阴交穴，加电，疏密波，强度以肌肉轻微抖动为度，时间持续15min，每天1次，共30d。 　　16　标本采集及检测项目 　　161　乳头高度测量　用精密油标卡尺测定治疗前后大鼠第2对乳头高度。 　　162　血清E2水平检测　实验结束后断头采血，血样经离心(2 000г/min×15min)，取血清，低温保存(-20℃)。采用放射免疫法测定。 　　163