酶的构建与表达.pdf

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2017-09-19 发布于湖北
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酶的构建与表达

酶的克隆与表达原核表达系统 Company Logo 优点：易于生长和控制用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择缺点：在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少糖基化修饰等常形成包涵体 Company Logo 微生物表达系统 3 Company Logo 3 Company Logo 转录调控序可控转列(转录终止多限制酶切录的启子，核糖体位点接头选择标动子结合位点）宿主体内志的编自主复制码序列的序列表达载体在基因工程中具有十分重要的作表达载体用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以上几种元件 Company Logo 核糖体结合位点启动子复制转录终止子起点 Company Logo Company Logo 外源蛋白高效表达的三要素基因基因宿主载体宿主载体基因是根本，载体是关键，宿主是外因 8 Company Logo 8 一个合适表达载体（质粒）的构件 1. 筛选标记 Amp，Kan，Tet 2. 可控的启动子 lac，lacUV5, trp，trc, tac，λPL，T7 3．翻译起始区 RBS，Met 4．多克隆位点（MCS） NdeI，EcoRI，SalI, SmaI * t