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酶的构建与表达
酶的克隆与表达
原核表达系统
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优点：
易于生长和控制
用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵
有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的
质粒可供选择
缺点：
在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少糖基化修饰等
常形成包涵体
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微生物表达系统
3 Company Logo
3
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转录调控序
可控转
列(转录终止 多限制酶切
录的启
子，核糖体 位点接头
选择标 动子 结合位点） 宿主体内
志的编 自主复制
码序列 的序列
表达载体在基因工程中具有十分重要的作
表达载体 用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达
载体应具有以上几种元件
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核糖体结合位点
启动子
复制
转录终止子 起点
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外源蛋白高效表达的三要素
基因
基因
宿主
载体 宿主
载体
基因是根本，载体是关键，宿主是外因
8 Company Logo
8
一个合适表达载体（质粒）的构件
1. 筛选标记
Amp，Kan，Tet
2. 可控的启动子
lac，lacUV5, trp，trc, tac，λPL，T7
3．翻译起始区
RBS，Met
4．多克隆位点（MCS）
NdeI，EcoRI，SalI, SmaI
* t
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