Vero细胞无血清培养基的发展.docVIP

　　Vero细胞无血清培养基的发展 　　商业化的无血清培养基由最初血清替代物的研究发展到了化学界定培养基的研究。目前，无血清培养基的发展趋势有两个方向，一是完全化学界定培养基； 二是不含任何动物组分的培养基。无血清培养技术常用的培养基分类如下。 　　第一代，不含血清，添加替代血清的生物材料。特点是培养基的蛋白含量高，增加了纯化工作的难度和成本。 　　第二代，无动物培养基，添加基因工程和重组蛋白或植物蛋白水解物。不含动物源性蛋白衍生物，既可保证产品的安全，又能保障细胞生长。 　　第三代，无蛋白培养基，培养基完全不含蛋白。利于纯化分离，培养基相对稳定，但应用局限. 　　第四代，化学鉴定培养基。培养基所含成分都是明确的，有利于细胞体外培养的代谢研究。无血清、无蛋白、无动物、成分明确的新型培养基是最理想、最安全的通用培养基，在细胞工程领域大规模生产病毒性疫苗、重组蛋白等制品方面应用广泛[3-4]. 　　1 Vero 细胞在病毒性疫苗中的广泛应用和优势 　　1. 1 Vero 细胞的 近年来随着生物技术的发展，动物细胞培养技术已从简单的试验研究拓展到了生物学研究和商业应用领域。生物制品如生物基因工程疫苗、病毒性疫苗、医学治疗性抗体的研究与生产都用到了细胞培养技术。应用最广泛最安全的动物细胞基质是 Vero 细胞。Vero 细胞是世界卫生组织（EMI 为 MEM 配方改良型，用 HEPES 和碳酸氢钠作为缓冲体系，添加了次黄嘌呤、胸苷、丙酮酸钠、L 谷氨酰胺、微量元素和生长因子的多功能培养基。 　　低血清培养基的问世和应用为无血清系列培养基的研发奠定了基础。 　　Vander 等[17]用激素替代牛血清刺激特定细胞分化生长的工作，开辟了化学界定无血清培养基的发展开端。无血清化学界定培养基的设计和优化是Vero 细胞无血清培养技术的关键。现今商业化的Vero 细胞无血清的配方设计比较通用的方法是选定一种基础培养基，如陈天等[18]推荐利用添加了胰岛素-转铁蛋白-硒元素（ITS） 的 DMEM/Ham F-12 混合培养基为基础培养基，通过响应面设计法、Plack-ett - Burman 法、多因素多水平正交设计等实验方法筛选和确定特殊的补充因子及含量来设计无血清培养基[17].Vero 细胞无血清设计常用到的特殊补充因子有生长激素、蛋白类、生长因子、贴壁因子、脂类等。 　　3. 1. 1 生长激素和生长因子 激素是无血清培养基的必需组分，如胰岛素，主要作用是增加细胞内的cAMP 水平，促进葡萄糖、氨基酸利用。除此以外，Vero 细胞无血清培养基还需添加糖皮质激素、甲状腺激素、胰高血糖素等激素。生长因子主要促进细胞的有丝分裂，在基础培养基中，生长因子都是通过牛血清引入的。Vero 细胞无血清培养基添加的生长因子有表皮生长因子、beta;-转化生长因子和血小板生长因子。文献[19]报道，在研发 Vero 细胞无血清培养基时添加了 100mu;g/L 的表皮生长因子，使 Vero 细胞的密度提高了15% .除了人为添加外，细胞在生长过程中也会释放一些生长因子促进自身的分裂。 　　3. 1. 2 蛋白质类 在实验研究中最常用的是牛血清白蛋白和转铁蛋白，白蛋白是低相对分子质量组分的载体。白蛋白主要是调节渗透压和保护细胞免受物理损伤，与维生素、脂类、激素、金属离子和生长因子结合，稳定和调节其在细胞培养过程中的活性。目前，无血清培养基的开发研究主要添加的是重组蛋白和植物水解蛋白[20].转铁蛋白通常和胰岛素、硒元素共同添加，简称 ITS 添加物，是大部分无血清培养基所必需的补充因子。 　　3. 1. 3 促贴壁因子 Vero 细胞是贴附依赖性细胞系，无血清培养基中必须添加促细胞贴壁的物质，使Vero 细胞在培养基质表面贴壁铺展生长。应用较广泛的是纤粘连蛋白、胶原蛋白、层粘连蛋白、多聚-L（或-D） 赖氨酸和鸟氨酸。 　　3. 1. 4 微量元素和脂类 除基础培养基配方提供的微量元素外，常添加的微量元素是硒元素，主要作用是消除自由基对细胞的损伤。脂类主要是储存能源、构成细胞膜结构以外，还在信号转运和传递中起作用。 　　3. 2 Vero 细胞无血清培养基的商业化开发 大多数无血清培养基的配方设计都申请了专利，秘而不宣，因此在大多基础实验室使用的是商业化的无血清培养基。Vero 细胞无血清培养技术的发展推动着无血清培养基的商业化开发，其质量也在不断提高。商业化的 Vero 细胞无血清培养基产品有MDSS2、ProVERO-1、EX-CELL Vero、VP-SFM、Opti-ProSFM、HyClone SFM4MegaVir 等[18]. 　　EX-CELL Vero 是 JRH 公司推出的针对高密度培养 Vero 细胞的含有重组蛋白和植物水解蛋白的无