β葡萄糖苷酶合成龙胆二糖及产物分离.PDFVIP

－ 林业工程学报，２０１７，２（２）：７６ ８２ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ － ｄｏｉ：１０．１３３６０／ ｊ．ｉｓｓｎ．２０９６ １３５９．２０１７．０２．０１３ β⁃葡萄糖苷酶合成龙胆二糖及产物分离 张林，王磊，吴广兴，勇强，余世袁∗ （南京林业大学化学工程学院，南京 ２１００３７） 摘　 要：以葡萄糖为原料，通过β⁃葡萄糖苷酶发生转糖苷反应制备龙胆二糖，研究不同来源的酶、反应温度、ｐＨ、 加酶量、底物浓度、反应时间等对龙胆二糖的影响。 结果表明：南京林业大学自产酶适合于龙胆二糖的制备，用 ９００ ｇ／ Ｌ的葡萄糖溶液，加酶量为６０ Ｕ／ ｇ 葡萄糖，在ｐＨ５、温度６０℃的条件下，以８０ｒ／ ｍｉｎ振荡转化２４ ｈ后得到 浓度为４６９ ｇ／ Ｌ龙胆二糖。 得到产物后采用高效阴离子交换色谱进行鉴定和定量。 阳离子交换树脂２ 次洗脱 分离后，得到纯度９７０％的龙胆二糖。 用制备的龙胆低聚糖增殖青春双歧杆菌，３６ ｈ代谢了含有碳元素７４９ ｍｍｏｌ／ Ｌ的碳源，生成含有碳元素６２１ｍｍｏｌ／ Ｌ 的有机酸和７１ｍｍｏｌ／ Ｌ 的菌体，菌体浓度增长了３８倍，表明实 验得到的龙胆二糖可以有效增殖对人体有益的青春双歧杆菌。 关键词：龙胆二糖；β⁃葡萄糖苷酶；阳离子交换树脂；青春双歧杆菌 － － － 中图分类号：Ｑ５３３　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 文章编号：２０９６ １３５９（２０１７）０２ ００７６ ０７ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ ｂｙβ⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ＺＨＡＮＧ Ｌｉｎ，ＷＡＮＧ Ｌｅｉ，ＷＵ Ｇｕａｎｇｘｉｎｇ，ＹＯＮＧ Ｑｉａｎｇ，ＹＵ Ｓｈｉｙｕａｎ∗ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００３７，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｇｌｕｃｏｓｅ ｃａｔａｌｙｚｅｄ ｂｙβ⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｖｉａ ｔｒａｎｓｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｏｕｒｃｅ ｏｆ ｔｈｅβ⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｐＨ，β⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ ｄｏｓｅ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＮａｎｊｉｎｇＦｏｒｅｓｔｒｙ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒ ｔｈｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ．Ｉｔ ｗａｓｆｏｕｎｄｔｈａｔ ｏｐｔｉｍａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ｇｌｕｃｏｓｅａｔａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ９００ｇ／ Ｌ ｗａｓａｄｄｅｄｗｉｔｈβ⁃ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅａｔａｄｏｓａｇｅｏｆ６０Ｕ／ ｇｇｌｕｃｏｓｅ；ｔｈｅｍｉｘｔｕｒｅｗａｓｉｎｃｕｂａｔｅｄａｔｐＨ５，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ６０℃ ｗｉｔｈ ａ ｓｈａｋｉｎｇ ｓｐｅｅｄｏｆ８０ｒ／ ｍｉｎ；ａｆｔｅｒ２４ｈ，４６９ｇ／ Ｌｏｆｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ．Ａｎｉｏｎｅｘｃｈａｎｇｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓｕｓｅｄ ｔｏ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ． Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔ ｗａｓ ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ ｂｙ ｉｏｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ． Ｃａｔｉｏｎ ｅｘｃｈａｎｇｅ ｒｅｓｉｎ ｗａｓｕｓｅｄ ｉｎ