他汀类药物对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-1及TIMP-1的影响.pdfVIP

本实验主要研究他汀类药物(立普托与美百乐镇)对大鼠腹腔巨噬细 胞分泌删P一1及其天然组织型抑制物TIMP一1的影响。 材料与方法 1．材料 1．1动物及巨噬细胞雄性sD大鼠4—6月龄，购自大连医科大 学动物实验中心；巨噬细胞来源于大鼠腹腔灌洗液。 1．2 州四季青生物材料工程公司)、M肝一1ELISA试剂盒(泛邦生物制荆有 限公司)、TIMP一1ELISA试剂盒(泛邦生物制剂有限公司)、阿托伐他 汀原药(大连辉瑞公司)、普伐他汀原药(中美上海施贵宝公司)、白 介素一1B(泛邦生物制剂有限公司)。 国)、相差显微镜(日本Olypus)、高速离心机(日本)、酶标仪(美国)。 2．方法 2．1 药品准各将立普托、美百乐镇分别溶于95％乙醇溶液中， 50‘C孵育2小时，使其在体外转化成活性形式，然后用三蒸水稀释， 的乙醇溶液不影响细胞的生理功能，各药品浓度分别为2×lO-3mmol／L、 2×i01mmol／L、2×lO-Smmol／L、2×lO。6mmol／L： 2．2 实验分组A一对照组A卜未加调脂药培养6小时，A2-未加 调脂药培养24小时，A3一未加调腊药培养48小时B一阿托伐他汀组 x B4一加阿托伐他汀1×lO衄ol／L培养24小时，B5-加阿托伐他汀1 24小时，“一加普伐他汀l×lO-mmol／L培养24小时， 2．3 巨噬细胞的收集大鼠乙醚麻醉后，断头处死。将动物仰 ·6‘ 卧放置，减去腹壁皮毛，用70％乙醇消毒，沿正中线剪开腹壁，将 5-IOmlPBS冲洗液注入腹腔，用吸管反复冲洗腹腔，将腹腔的细胞悬液 吸入离心管，离心(1000r／min)2次，然后用培养液混悬沉淀细胞， 将细胞悬液加入培养皿，培养4小时，吸去培养液，用PBS液清洗2 次，除去漂浮的细胞，采用副取的方法取出贴壁的巨噬细胞，离心 2．4 B 5％C0：的条件下培养3天后，改用无血清培养基培养，加入IL—l 10‘7mmol／L)进行培养，然后根据实验要求，分组吸取上清进行指标检 测： 2．5 试剂盒的说明书进行； 2．6 统计学分析所有数据均采用Mean±SD，统计学处理采用 认为有统计学意义 结 果 给药浓度的增加，阿托伐他汀对IL-1B介导的删P一1的分泌的抑制逐 着给药时间的延长，阿托伐他汀对I卜lB介导的M肝一l的分泌的抑制 逐渐增强，阿托伐他汀给药时间分别为6小时、24小时、48小时，h衄，一1 B介导的MMP一1的分泌呈时间剂量依赖性。如图3所示，不同浓度的 ·‘ B介导的TI肝一l的分泌略有减少，但与对照组比 阿托伐他汀可使IL-l 较无统计学意义。 表l不同浓度的阿托伐他汀对大鼠腹腔臣噬细胞分泌MMP-I及TIM卜1的影响 注：“·”表示P0．05，与对照组比较有统计学意义； “¨”表示PO．05．与Bl组比较有统计学意义。 x105mmol／L) 表2不同作用时间的阿托伐他汀(浓度为1 对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-I的影响 注：“．”表示PO．05，与对照组比较有统计学意义． 的普伐他汀使IL一1B介导的删P-I的分泌略减少；如图5所示，不同 浓度的普伐他汀使IL-19介导的TIMP一1的分泌也略减少，但两者与对 照组比较，均无统计学意义，故普伐他汀对埘P一1及TI肝一1的分泌均 无影 表3普伐他汀对大鼠腹腔巨噬细胞分泌MMP-I及TIMP-I的影响 图l不同浓度阿托伐橇玎jc孛大飙馥腔巨噬细胞分澄嘣P—l 的影响 12 lO 8