目的要求学习并掌握不同类型的微生物发酵方法发酵过程的监控.PDFVIP

目的要求： 学习并掌握不同类型的微生物发酵方 法、发酵过程的监控、发酵产物的提取及 分析测定方法以及化学诱变育种的方法。 实验内容 L －赖氨酸发酵及过程监控 L －赖氨酸含量测定 糖蜜原料的酒精发酵及测定 柠檬酸的浅盘发酵及测定 柠檬酸提纯 硫酸二乙酯对枯草芽孢杆菌产生α-淀粉酶的诱变效应 L －赖氨酸发酵及过程监控 基本原理 本实验采用的赖氨酸生产菌种是北京棒状杆菌A.S.1.563 ， 它是高丝氨酸营养缺陷型，丧失了高丝氨酸脱氢酶活力，无法 合成高丝氨酸。这样就切断了苏氨酸和蛋氨酸的合成途径，导 致赖氨酸合成量的增加。 L －赖氨酸发酵及过程监控 方法与步骤 保存菌种 活化 斜面 30℃24h 一级种子 种子培养基配制 初pH,初OD 30℃16h摇瓶 终pH,终OD，镜检 发酵 发酵培养基配制 初pH,初OD，初糖 30℃72h摇瓶 终pH,终OD，残糖 L-lys 含量，转化率 菌种活化（斜面转接） 录 像 Lys发酵：种子培养基和发酵培养基的配制 公用试剂 固体：葡萄糖、硫酸铵、碳酸钙 液体：玉米浆（100%），豆饼消解液（10%），糖蜜（含总糖30% ） （注：碳酸钙在定容、调pH 、分装后再加入。） 配方浓度 取贮备液量＝ ×培养基体积 贮备液浓度 每组配种子培养基100mL，分装到2个250mL三角瓶；配 发酵培养基Ⅰ、Ⅱ各60mL，分别分装到2个250mL三角瓶。 八层纱布包扎。121℃高压灭菌20min 。 L-Lys发酵：过程的测定 接种：斜面→一级种子：1环 种子液→发酵液：2mL pH值测定：采用pH计 OD值测定：取发酵液2mL ，加1mol/L盐酸2mL，混匀（以除去 CaCO3 ），再加蒸馏水6mL，混匀。（此为5倍稀释液，发 酵后期的样品应取此稀释液再进行适当稀释。）用722s型 分光光度计于650nm测定。 总糖测定：采用手持式糖量计。（根据溶液的折光原理，糖 浓度越高，折光率越大。） 种子镜检：采用细菌的简单染色法（录像）：涂片→干燥→固 定→染色→水洗→干燥→镜检 L-Lys测定：见实验二 发酵终时产物含量% 转化率计算： 转化率＝ ×100% 发酵液初糖含量% L －赖氨酸的含量测定 基本原理 采用电泳法测定。赖氨酸是碱性氨基酸，等电点是9.74， 在pH