棉酚降解菌菌株B5的选育.docVIP

棉酚降解菌菌株B5的选育 1、相关定义 1.1、酶活力测定及酶活单位定义 (1)乳酸试剂盒的用法: 酶工作液配制:临用前将 R2和 R1按照 1:100 的体积比进行混合,现用现配, 2~8保存 24h 内有效。 显示剂配制:使用前取 R4粉剂 1 支倒入 1 瓶 R3液体中,待粉剂全部溶解后, 用微量移液器取少许液体打入离心管中,反复颠倒离心管,再用微量移液器将离 心管中的液体转移到瓶中,如此反复 2~3 次,充分混合,配成显色剂,2~8 避光保存 2 周有效。 16 表 2-1 试剂盒操作步骤 加样管 试剂 空白管 B(μL) 标准管 S(μL) 测定管 U(μL) 蒸馏水 50 - - 3mmol/L 标准液 - 50 - 标本 - - 50 酶工作液 500 500 500 显示剂 100 100 100 混匀,37水浴准确反应 10min 终止液 1000 1000 1000 混匀,530nm,1cm 光径,蒸馏水调零,测各管吸光度。 计算公式: 乳酸含量(μmol/mL)=(ODU-ODB)/(ODS-ODB)×CS×N ODU—测定管吸光度值; ODB—空白管吸光度值; ODS—标准管吸光度值; CS—标准浓度(3mmol/L); N—样品测试前稀释倍数。 (2)酶活力定义:1 小时内生成 1μmol 乳酸所需的酶量定义为一个酶活力(U) 。 1.2、石油的概念和组成 生物经过漫长的演化形成的混合物,其成分非常 广泛。组成石油的化学元素主要是碳(83 %~87 %)、氢(11 %~14 %),其余 为硫(0.06 %~0.8 %)、氮(0.02 %~1.7 %)、氧(0.08 %~1.82 %)及微量金属 元素(镍、钒、铁等)[4]。 1.3、酶活测定及酶活单位定义 使用紫外分光光度计,以 PCL 为底物测定 PCL 降解酶活力,波长为 650nm。按 3mL 底物与 1mL 酶液比例混合,测反应前后的吸光度值,反应前后吸光度的差值即为酶活 力的大小。 酶活单位定义为:每分钟引起光吸收降低 0.001(A650nm)单位所需的酶量。 1.4、日粮纤维的定义 粗纤维(crude fiber,CF)曾经被认为是一种不可被单胃动物消化的物质。在 1860 年 CF 被发现是一种可被反刍动物消化的物质,而且是反刍动物的一种营养物质(Henneberg Stohmanm,1860)[1]。AOAC 在 1890 年首次提供了 CF 的测定方法。实际上 CF 被定义为日 粮纤维(diet fiber,DF)己经超过 100 多年了(Mertens,2003)。日粮纤维,一般泛指饲 料中那些来源于植物,但又不能被动物胰腺或小肠消化酶所消化的细胞壁成分。常用来表达 日粮纤维的名词术语有可食性纤维(edible fiber)(Godding,1976[)2]、日粮纤维(Dietary fiber)(Trowell,1972)[3]、不可消化的残渣(indigestibile residue)(Hellendoorn, 1981)[4]、日粮纤维复合物(Dietary fiber complex)(Trowell,1976)[5]、不可利用的 碳水化合物(unavailable carbohydrate)(southgate,1975)[6],但迄今为止,营养学家 对日粮纤维的定义仍未获得完全统一的看法。长期以来一直沿用”粗纤维”(Crude fibre) 概念。 随着纤维研究的深入,人们发现原有的关于纤维的定义不能满足进一步研究的需要。 Hipsley(1953)[7]首次用”DF”这个词来形容日粮的性质。Goering Van Soest(1970) [8] 提出 中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的概念,并将它们列入纤维成分。Trowell (1972)第一次引用了”日粮纤维”这一名词,以取代”粗纤维”,现在已被国际所通用。 5 卢德勋(1998)[9]提出,日粮纤维的定义应该包括四层含义:(1)日粮纤维是日粮内由 一种具有特殊营养生理作用的复合成分,日粮内组成纤维的单个成分的营养作用并不等于是 日粮纤维整体的营养生理作用。(2)应该突出日粮纤维的组成,即由结构性和非结构性成分 两部分构成。(3)应该反映出日粮纤维的品质,即使用可利用指标来取代原来的粗指标。(4) 日粮纤维的分析方法应以全面反映日粮纤维定义的上述三层含义为原则,并具有操作简便、 易行、快速、重复性强的特点。 日粮纤维是由多种物质组成的复合物(Roberfroid et al.,1993)[10],由于组成的复杂性, 给日粮纤维的定义和研究带来了很大的困难。虽然人们无法得到一个十分确切的 DF 的定义, 但 DF 是植物细胞壁的主要组