转基因菊花遗传稳定性及杂交育种的研究.pdfVIP

转基因菊花遗传稳定性与杂交育种的研究 王春能，张启翔，高亦珂，陆苗 北京林业大学园林学院，国家花卉工程中心，北京（100083 ） E-mail: zqx@ 摘 要：本研究对获得的转CHS基因地被菊品种‘美矮黄’植株的表现进行观察，对外源基因 的遗传稳定性进行了研究，并利用转基因植株为亲本进行了杂交育种。为研究转入基因在转 化植株中能否稳定存在并遗传给后代，对转基因株系048进行了无性繁殖和有性繁殖。无性 繁殖包括花瓣培养和组培苗多次继代，有性繁殖为将转基因株系048的植株进行杂交。对获 得的无性繁殖和有性繁殖的后代进行PCR检测。结果表明，转入的外源基因能够在组培苗继 代的过程中稳定存在。在花瓣培养和杂交后代中也检测到了外源基因的存在。利用转基因株 系048和032的植株在春季进行了杂交育种。结果表明将杂交育种与促成栽培相结合，在温室 中进行春季杂交是加速菊花育种的有效方法，可缩短育种的周期，获得表现丰富的杂交后代。 关键词：分子育种；遗传稳定性；杂交育种；CHS 1. 引言 菊花(Dendranthema×grandiflorum)是世界上最重要的观赏花卉之一，也是我国具有悠久 栽培历史的传统名花。加强菊花育种具有很强的经济效益和社会效益。传统的育种方法都受 到物种自身基因的限制，远源杂交虽取得了一些成果，但也还受杂交亲和性的影响不可能随 意引入需要的基因。转基因技术的发展为菊花育种提供了全新的思路和途径。与传统育种比 较而言，转基因具有独特的优势:通过引入控制某种性状的基因而扩大其基因库；定向修饰 花卉的某些目标性状而不改变其原有的性状等。传统的育种方法与现代的转基因育种技术的 [1] 结合将为菊花的育种带来广阔的前景 。 利用转基因植株为亲本进行杂交育种是一种新的尝试，为菊花育种提供了一条新的途 径。在国内外，应用转基因技术进行育种研究己有报道，但目前我国关于转基因菊花田间表 现及转入外源基因稳定性的全面研究还是空白。本课题组已将与花色代谢有关的查尔酮合成 酶基因(chalcone synthase, CHS)转入优良的地被菊品种‘美矮黄’中[2] 。本试验的目的在于对其 田间表现进行研究，便于利用；了解转入外源基因的稳定性，将现代的转基因技术与传统育 种相结合，以转基因菊花为亲本进行育种，丰富菊花品种。 2. 材料与方法 2.1 试验材料 2.1.1 转基因菊花 在继代培养基上生长的未转基因菊花品种‘美矮黄’及转基因（CHS）‘美矮黄’ 032和048 两个株系。 2.1.2 未转基因菊花杂交亲本 为了丰富花色选择了地被菊品种‘红地毯’、‘紫勋章’、‘矮美黄’，及小菊品种‘小黄’、‘新 紫’；为了丰富花型选择托桂型的菊花品种‘红草幕；为了培育能两季开花的菊花品种选择‘药 红’、‘朝鲜粉’为亲本；为提高菊花的抗性并利于对后代遗传情况进行分析，选择毛华菊(D. vestitum) 、甘菊(D. lavzndulifolium) 和菊花脑(D. nankingensis)为亲本。 - 1 - 2.1.3 外源基因遗传稳定性的检测 有性繁殖048×择‘药红’后代，048花瓣培养的后代，转基因株系05、033、042、08反复 继代获得的后代。阴性对照：野生型的幼嫩叶片；阳性对照：含选择标记基因的质粒DNA 。 P CR引物：PCR反应中所使用的引物是根据潮霉素抗性基因设计的，序列为： 5’primer：CGT CTG CTG CTC CAT CAC AG 3’primer：GGA AGT TCA TTT CAT TTG GA 2.2 试验方法 2.2.1 转基因菊花的表现 取转基因菊花株系032、048及野生型组培苗各20株进行炼苗，成活后种植于温室中。温 室气候由计算机系统（Argus ）控制。记录各转基因与野生型植株的形态特征，每半月记录 一次。形态指标包括：节数、节间长、叶长、叶宽、叶长宽比、花径、花数和重瓣性。其中 节间取