非洲 猪瘟 病 毒衣 壳蛋 白P72在 大肠杆 菌 中的表达.PDFVIP

— — 维普资讯 第28卷 第3期 中 国 预 防 兽 医 学 报 V01．28．No．3 2006 41i 5 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine May 2006 非洲猪瘟病毒衣壳蛋白P72在大肠杆菌中的表达 李维彬1,2，蒋正军 ，王玉炯 ，许崇波 ，龚振华 ，刘俊辉 ，郭福生 ，郑增忍 (I，农业部 动物榆疫所 ，山东 青岛266032；2．宁夏大学 生物技术重点实验室，宁夏银川 75002I) 摘 要 ：利用PCR技术，从含非洲猪瘟(ASFV)P72基 因的克隆质粒BBBBPr4中扩增 出1．94kb的P72基因．． 将P72基因和表达栽体pET一30c(+)分别用限制性核酸 内切酶FbaI／XHoI和BamHI／XHoI进行双酶切，然后 在T4DNA连接酶作用下，将P72基因定向克隆至栽体pET一30c(十)中相应位点上，并转化至宿主菌BL21(DE3)中， 得到 了重组菌株BL21(DE3)(pET—ASFVP72)。经PCR鉴定 ，构建的重组菌株 中合有P72基 因。重组菌株BL21 (DE3)(pET—ASFVP72)经IPTG诱导后，其表达产物经SDS．PAGE和Westernblot分析，结果表 明衣壳蛋白P72基因可 以在受体菌中高效表达，达到了菌体总蛋白的34％，表达产物的分子量约为78Ku，并能被ASFV抗体所识别。 关键词：非洲猪瘟病毒；衣壳蛋白P72；表述 中图分类号：S852．651 文献标识码：A 文章编号 ：1008．0589(2006)03—0267—04 ExpressionofcapsidproteinP72ofAfricanswinefever V-IrUS I’n 上r=一=．C0f-f0 LIWei—bin，，JIANGZheng-jun’，WANGYu—jionga，XUChong-bo，GONGZhen—hua，‘ LIUJun-hui，GUO Fu—sheng，ZHENG Zeng—ren (1．AnimalQuarantineInstitute，MinistryofAgriculture，Qingdao266032，China； 2．LifeScienceSchool，NingxiaUniversity，Yinchuan75002I，China) Abstract：The1．94kbP72genewasampliedfrom plasmidBBBBPr4bypolymerasechainreactionfPCR)．ThePCR productsweredigestedwithrestrictionendonucleasesFbaI ／XHoI．andthenP72genewasinsertedintotheBam H I／XhoI siteofpET一30c(+)vector．ThentheconstructedrecombinantplasmidwastransformedintoBL21(DE3)，therecombinantstrain BL21(DE3)(pET-ASFVP72)wasobtained．Itsexpressedproductwasabout34％ oftotalcellularproteinbySDS—PAGEand thin—layergelscanninganalysis．Itsmolecularweight