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Apoptosis and Autophagy Edward Li Ph.D. Cell Signaling Technology © 2013 Cell Signaling Technology, Inc. 讲座内容 • 凋亡与自噬的基本概念 • 凋亡与自噬相关信号通路 • 凋亡与自噬的检测 • 凋亡与自噬的相互转化 细胞程序性死亡（PCD ） •  程序性细胞死亡(Programmed Cell Death, PCD) ，是指细胞接受 某种信号或受到某些因素刺激后 ，为了维持内环境稳定而发生的 一种主动性消亡过程。它既出现在个体正常的发育过程中 ，也出 现在非正常生理状态或疾病中 ；既在体内发生 ，也发生在体外培 养物中。 •  凋亡和自噬性死亡是程序性死亡的表现形式 凋亡 •  细胞凋亡是指为维持内环境稳定 ，由基因控制的细胞自主的有序 的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同 ，细胞凋亡不是一件被动的过 程 ，而是主动过程 ，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等 的作用 ，它并不是病理条件下 ，自体损伤的一种现象 ，而是为更 好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 自噬 •  自噬是自噬溶酶体降解其所包裹的细胞质内容物的一个分解代谢 过程。通常情况下 ，自噬在营养匮乏的时候被激活 ，但它还与许 多生理过程相关 ，包括生长、分化、神经退行性疾病、感染和癌 症。自噬的分子机制主要在酵母中发现的 ，并称之为自噬相关基 因。自噬体的形成涉及一个泛素样连接体系 ，并涉及与其他细胞 器的相互作用。 凋亡的多重机制 •  Caspace依赖型细胞凋亡 ① 死亡受体途径 ；② 内质网压力途径 ；③ 线粒体途径 •  Caspase 非依赖型细胞凋亡 包括Bcl 家族蛋白质Bax 诱导的细胞死亡 ，也涉及到其他 蛋白酶 ，如钙蛋白酶、蛋白酶体及丝氨酸蛋白酶的细胞死 亡。 凋亡的主要过程 Nature Review in Cell Biology, 8:741-752 凋亡的主要特征 •  1 ．形态学变化 形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的 ，细胞凋亡往 往涉及单个细胞 ，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。 首先出现的是细胞体积缩小 ，连接消失 ，与周围的细胞脱 离 ，然后是细胞质密度增加 ，线粒体膜电位消失 ，通透性 改变 ，释放细胞色素C到胞浆 ，核质浓缩 ，核膜核仁破碎 ， DNA降解成为约180bp-200bp片段 ；胞膜有小泡状形成 ， 膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面 ，胞膜结构仍然完整 ， 最终可将凋亡细胞遗骸分割包裹为几个凋亡小体 ，无内容 物外溢 ，因此不引起周围的炎症反应 ，凋亡小体可迅速被 周围专职或非专职吞噬细胞吞噬。 凋亡的主要特征 •  2 ．生物化学变化 1 ）DNA的片段化 细胞凋亡的一个显著特点是细胞染色体的DNA降解 ， 这是一个较普遍的现象。这种降解非常特异并有规律 ，所 产生的不同长度的DNA片段约为180-200bp的整倍数 ，而 这正好是缠绕组蛋白寡聚体的长度 ，提示染色体DNA恰好 是在核小体与核小体的连接部位被切断 ，产生不同长度的 寡聚核小体片段 ，实验证明 ，这种DNA的有控降解是一种 内源性核酸内切酶作用的结果 ，该酶在核小体连接部位切 断染色体DNA ，这种降解表现在琼脂糖凝胶电泳中就呈现 特异的梯状Ladder图谱 ，而坏死呈弥漫的连续图谱。 凋亡的主要特征 2 ） 大分子合成 细胞凋亡的生化改变不仅仅是DNA的有控降解 ，在细 胞凋亡的过程中往往还有新的基因的表达和某些生物大分 子的合成作为调控因子。如我们实验室发现的TFAR-19就 是在细胞凋亡时高表达一种分子 ，再如在糖皮质激素诱导 鼠胸腺细胞凋亡过程中 ，加入RNA合成抑制剂或蛋白质合 成抑制剂即能抑制细胞凋亡的发生。 凋亡的过程机理 • 接受凋亡信号→凋亡调控分子间的相互作用→蛋白水解酶 的活化（Caspase ）→进入连续反应过程 细胞凋亡的启动阶段 •  1 ）细胞凋亡的膜受体通路 ：各种外界因素是细胞凋亡的启动剂 ，它们可以通过不同