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CRISPRCAS9慢病毒系统概述
CRISPR/CAS9慢病毒系统
吉凯基因
CRISPR/CAS9系统原理
CRISPR/CAS9系统：
基因组定点切割系统。
定点：sgRNA ，碱基互补配对
切割：CAS9蛋白，核酸内切酶
让我们用心，换取您的放心！
CRISPR/CAS9系统原理
无模板 有模板
随机修复（NHEJ ） 重组修复(HDR)
读码框移位 精确插入碱基
蛋白无表达 Knock in
Knock out
Gene knock out Gene knock in
让我们用心，换取您的放心！
CRISPR/CAS9 VS RNAi-敲除效果
lentiCRISPRs abolished EGFP fluorescence in 93 ±8% of cells
after 11 days.
参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005
Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.
CRISPR/CAS9 VS RNAi-靶点一致
靶点间一致的概率：
CRISPR/CAS9：78 ±27%
shRNA：20 ±12%
参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005
Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.
CRISPR/CAS9 VS RNAi-表型呈现
RNAi 敲减OK 无表型 CRISPR/CAS9 表型明显
参考文献：Science. 2014 Jan 3;343(6166):84-7. doi: 10.1126/science.1247005
Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout screening in human cells.
CRISPR/CAS9 VS RNAi
与RNAi相比，CRISPR/CAS9在基因功能学研究中具有独到优势：
对比 RNAi CAS9
作用水平 mRNA水平 基因组水平
所有基因组序列，如外显子，内含
靶位点范围 仅转录本
子，启动子，增强子，基因间序列等
靶蛋白消除水平 不完全消除 完全消除
靶蛋白
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