荧光定量PCR_完整版 螺旋.pdfVIP

08 年第一期螺旋课堂-- “荧光定量PCR 技术” 螺旋网(/) 是一个以分子生物学实验及对实验结果进行处理为核心，以生物技术前沿发 展为导向的一个专业型科学技术讨论社区。 本着“共分享，同成长”的理念，给广大生物科研工作者一个交流经验、分 享资料的平台。 螺旋网版块设置主要分为三个部分： 实验技术交流（实验互助） 实验结果处理（生物信息学） 实验之余的生活 螺旋网的特色： 1、毕赤酵母表达系统； 2、发酵工艺 3、螺旋课堂； 4、Seminar； 5、生物学科研究进展； 6、实验交流及生物信息学。 欢迎广大生物专业的同学和爱好生物学的朋友加盟，共同学习， 共同进步！ 螺旋网： 祝大家新年快乐，万事如意! 08 年第一期螺旋课堂-- “荧光定量PCR 技术” 2008 年螺旋课堂的课程计划！ 2007年已悄然逝去，2008年已向我们扑面而来。08年是共和国发展的关键 一年，也是螺旋网抓住机遇，加快发展的关键一年。今年螺旋网将为各位螺友提 供大量的关于生命科学的讨论主题，让各位螺友对生命科学的灵感相互碰撞，达 到共鸣。还有螺旋网将联合一批一线生命科学人员为您的研究保驾护航。同时还 将为大家提供各种资源包括各类电子书、生命科学研究进展、生物软件等。 为此，螺旋课堂08年的课程将围绕着最新的研究方法、研究进展进行课程 设置。具体安排如下： 第一期：荧光定量 PCR 技术 第二期：原位杂交技术 第三期：引物的设计原理及方法 第四期：BAC 库的构建技术 第五期：手把手教你进行序列分析 除以上技术外，欢迎大家点播！ 以上讲座的具体时间详见论坛通知! 螺旋网： 祝大家新年快乐，万事如意! 08 年第一期螺旋课堂-- “荧光定量PCR 技术” 螺旋课堂第一课－－荧光定量 PCR 技术 Janson PCR 技术的发明极大地推动了分子生物学的发展，而且迅速被推广和应用 到生命科学的各个领域，可以说它是目前核酸分子水平的基础及应用研究中使用 最广泛的一项技术。 常规 PCR 中，在扩增反应结束之后，我们一般通过凝胶电泳的方法对扩增 产物进行定性的分析，无法对 PCR 扩增反应进行实时检测，也无法对起始模板 准确定量，而很多情况下，我们所感兴趣的是起始模板量，如转基因动植物中插 入某种外源基因的拷贝数或者病人中某种病毒 DNA/RNA 的精确 copy 数等，如 此，荧光定量 PCR 技术便应运而生。 本文将分为三大部分向大家介绍，首先是理论篇：首先了解荧光定量 PCR 的理论知识，如荧光定量 PCR 技术的原理、方法等；随后为实践篇：如实验的 操作流程、注意事项、方法选择、结果分析与处理等；第三部分为问题分析与解 答篇：荧光定量 PCR 过程中有哪些常见问题，我们如何避免和解决。 螺旋网： 祝大家新年快乐，万事如意! 08 年第一期螺旋课堂-- “荧光定量PCR 技术” 第一章 理论篇 一、荧光定量 PCR 技术发展史 1993 年，日本 Higuchi 等人首次采用动态 PCR 方法和封闭式检测方式对 目的核酸数量进行定量分析，首次提出了荧光定量PCR 技术的概念。当时他使 用了 EB （溴乙锭）作为荧光标记染料，采用一台经过改良的热循环仪，用UV 射线照射样品然后通过 CCD 相机检测产生的荧光