创新性频闪式光学映射系统之研制.pdfVIP

創新性頻閃式光學映射系統之研製 陳亮嘉 賴宇俊 張偉倫 台灣大學 機械系 馬偕紀念醫院 醫研部 台北科技大學 自動化所 lchen@.tw laiyj@.tw t8618005@.tw 摘要 光學式影像映像系統，為心臟病理研究之儀器，系統是以光學方式量測心臟電生理訊號變化的技術。 此技術利用電壓敏感性之螢光染劑打入連結有灌流系統的離體心臟，並於心臟表面照射特定波長之光 源，使心臟激發出螢光，此螢光會隨心臟細胞電位變化而有光強訊號強弱變化，並利用影像擷取系統 記錄螢光強弱變化，進而分析心臟表面細胞電生理變化。螢光的特性，在於變化迅速快且螢光強度訊 號弱，因此影像擷取必須使用高速紀錄設備，且須有高動態解析及高光量子效率的特性。傳統光學影 像映射系統，為達其高速擷取之效果，一般系統之影像解析度不佳，且系統造價較高，欠缺分析軟體， 為其主要之限制。本研究為突破上述的技術限制 ，使用頻閃技術，搭配影像擷取器取像，藉由組合不 同週期的電位訊號，提升空間和時間解析度，且降低影像擷取器之成本。研究利用顯微鏡架構建造一 套頻閃式光學映射系統，包含系統架構之組成以及訊號分析軟體，完成初步之方法可行性探討，預期 將對心臟對生理研究能有貢獻。 關鍵字：頻閃技術、光學映射(optical mapping) 、心臟電生理 壹、 前言 近年來，隨著經濟發達，飲食習慣改變，偏向攝取高熱量、高脂肪的食物，且缺乏運動的習慣，使得 心臟疾病常在國內十大死因排行中列名，根據行政院衛生署公布的民國九十九年國人十大死因中，心 臟疾病在排行中高位居第二位，有鑑於此，心臟疾病的研究扮演著非常重要的角色。心臟為生物循環 系統的重要器官，透過心肌的收縮與舒張，將血液輸送至全身各處，以提供氧氣，維持生物的生命， 而之所以能夠造成心肌收縮與舒張的主因，在於心肌細胞膜內外，離子濃度改變壓差引發心肌動作 。 在傳統心肌細胞膜內外電生理訊號研究上，以心電圖的觀測使用最廣泛，在微觀的研究工具，早期是 以細胞上的微電極接觸式量測膜電位的電位變化，後期發展出非接觸式的光學量測技術，利用電壓敏 感性螢光染劑，在細胞膜電位改變時 ，螢光光譜飄移的效應，配合適宜的波長過濾，藉以記錄光強的 改變，以分析電位變化，稱為光學式影像映射系統，利用此非接觸的量測，減少了於組織的傷害，為 心臟電生理的重要工具。 貳、 研究方法 光學映射系統工作原理 ，為將特定波長的光源，照射於含電壓敏感螢光染劑的離體心臟表面 ，透過記 錄其激發螢光的光強變化，分析心臟表面細胞的動作電位變化。如下圖 1 光學映射系統工作原理[1] ， 為一典型的系統架構，特定波長的光源通過一濾波片後，經一分色分光鏡反射並透過聚焦鏡聚焦於心 臟表面，含有電壓敏感螢光染劑的心臟激發出螢光後，返回聚焦鏡組並穿透過分色分光鏡，再經一濾 波片濾除雜光後至擷取器，隨著心臟表面細胞膜內外電位變化，所激發的光譜改變，造成累積的光強 改變，透過此機制研究心臟電生理訊號，我們將逐一介紹光學映射原理及頻閃技術和實驗系統及流 程。 1 含電壓螢光染劑之 灌流離體心臟 聚焦鏡 分色分光鏡 螢光濾波板 心臟 光偵測器 激發光濾波板 光源 光學系統 圖1 光學映射系統 一、光學映射原理 電壓敏感染料( di-4-ANEPPS )是可以把可激動細胞表面膜電位變化轉換為近似線性變化的光學信號。 1985 年Loew 等發現細胞激發出的螢光光譜會隨著膜電位強度而改變[2] ，並於1992 年研究了在細胞 膜、細胞、灌流組織等上的光學特性[3] 。透過