如何更好地使用和维护液相色谱-2014.pdf

如何更好地使用和维护液相色谱 沃特世科技（上海）有限公司 ©2012 Waters Corporation 1 什么是液相色谱？  高效液相色谱是色谱法的一个重要分支  以液体为流动相 ，采用高压输液系统 ，将具有不同极性的单 一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固 定相的色谱柱 ，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检 测，从而实现对试样的分析。 ©2012 Waters Corporation 2 HPLC简图 色谱柱 (固定相) 数据系统 溶剂 进样器 (流动相) 泵 检测器 废液 ©2012 Waters Corporation 3 高效液相色谱仪的主要构成  输液系统 输液泵（四元梯度？二元高压梯度？）  进样系统 手动进样器/ 自动进样器  分离系统 色谱柱+柱温箱  检测系统 检测器（紫外、荧光、PDA、质谱等）  结果处理系统色谱工作站：Empower3 等 ©2012 Waters Corporation 4 目 录 一、系统启动前的准备 二、样品的前处理 三、系统启动与维护 四、色谱柱的使用与维护 ©2012 Waters Corporation 5 一、系统启动前的准备 ©2012 Waters Corporation 6 液相色谱对流动相的要求  液相色谱仪器对流动相的要求 ——与检测器匹配 ——脱气 ——避免用含卤素离子的缓冲盐（不锈钢系统） ——溶剂的粘度 ——防止细菌的生长 ©2012 Waters Corporation 7 液相色谱柱对流动相的要求  色谱柱对流动相的要求 —过滤除去微粒 —纯度的要求 o 超纯水，或用KMnO 处理过的双蒸水 4 o 有机溶剂：色谱纯(溶剂中的杂质含量尽可能低) ，并与填料相匹 配 —缓冲液的pH值，在填料的允许范围(一般在pH2-8)内 —缓冲液（盐）的浓度不要太高(≤100mM) —流动相对样品的溶解度 o 调整有机溶剂和水的比例 o 最好用流动相溶样 ©2012 Waters Corporation 8 溶剂的选择-1 ：通用溶剂