miR-19a对非小细胞肺癌细胞组织因子的调控作用及-tumor-肿瘤.PDF

肿瘤2014 年9 月第34 卷第9 期　TUM OR Vol. 34, September 2014　　 803 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2014.09.005 Copyright© 2014 by TUM OR Basic Research 基础研究 · miR-19a对非小细胞肺癌细胞组织因子的调控作用及细胞增殖的影响 1 1 2 3 2 2 2 1 2 1 卢彦霖 ，祁慧薇 ，粟　波 ，徐　鑫 ，唐　亮，张　颉 ，沈丽平 ，季现秀，辛灵艳 ，范理宏 同济大学附属上海市肺科医院1. 肿瘤科；2 . 中心实验室；3. 医务科，上海　200433 [摘要]　目的：探讨微小RNA （microRNA ，miRNA ，miR ）-19a 对非小细胞肺癌 （non-small cell lung cancer ， NSCLC ）PC9 细胞组织因子 （tissue factor ，TF ）的调控作用及细胞增殖的影响。方法：将hsa-miR-19a 模拟 物 （hsa-miR-19a-mimic ）、hsa-miR-19a 抑制物 （hsa-miR-19a-inhibitor ）、hsa-miR 阴性对照 （hsa-miR-negative control ，hsa-miR-NC ）分别瞬时转染PC9 细胞后，应用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞中miR-19a 的表 达，CCK-8 （cell counting kit-8 ）法检测细胞的增殖情况，FCM 法检测细胞周期的变化。利用生物信息学软件预 测miR-19a 的靶基因，通过荧光素酶报告基因检测系统和蛋白质印迹法对预测的潜在靶基因进行验证。结果： Hsa-miR-19a-mimic 转染组PC9 细胞中miR-19a 的表达水平明显高于空白对照组 （只加脂质体）和阴性对照 P ＜0 .0 1 ），而hsa-miR-19a-inhibitor 转染组PC9 细胞中miR-19a 的表达水平明显低于空白对照组和阴 组 （ 性对照组 （ P ＜0 .05 ）。转染hsa-miR-19a-mimic 可抑制PC9 细胞的增殖，而转染hsa-miR-19a-inhibitor 可促 进PC9 细胞的增殖 （P ＜0 .05 ）。Hsa-miR-19a-mimic 转染组PC9 细胞被阻滞于G / G 期，而hsa-miR-19a- 0 1 inhibitor 转染组G2/M 期细胞所占比例增加 （P ＜0 .0 1 ）。荧光素酶报告基因检测提示，T F 基因受miR-19a 负 调控。Hsa-miR-19a-mimic 转染组T F 蛋白的表达水平低于空白对照组和阴性对照组，hsa-miR-19a-inhibitor 转染组则相反 （ P ＜0 .0 1 ）。结论：miR-19a 可以调控TF 的表达并抑制PC9 细胞的体外增殖。 [关键词]　癌，非小细胞肺；微RNAs ；凝血致活酶；细胞增殖；细胞周期 [中图分类号]　R734.2 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2014) 09-0803-08 The regulation effects of miR-19a on expression of tissue factor and the cell proliferation of NSCLC cells 1