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液相部分基础培训 赵春华 华测检测青岛 液相色谱理论和发展简况 色谱法的分离原理： 溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时， 由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离 Tswett 试验 子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留 时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析 法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett ）在 1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法 (Chro m ato g rap hy)因之得名。后来在此基础上发展出： 纸色谱法 薄层色谱法 气相色谱法 液相色谱法。 2 3 Tswett 试验 4 5 液相发展过程  经典液相色谱法：用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输 送流动相，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）  高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography， HPLC) ：60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它 与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效， 但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法 (High Pressure Liquid Chromatography，HPLC) 。又因分析 速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chro m ato g rap hy ，HSLP) 。也称现代液相色谱。  超高效液相色谱（Uplc Ultra Performance Liquid Chromatography) 基于小颗粒填料和LC原理的创新性技术，实现 超高分离度、灵敏度、分析效率。2004 年waters 推出。分离过程快 了9倍且分离度保持不变 。 6 HPLC有以下特点：  高压——压力可达150~ 300 Kg/ cm2。色谱柱每米降压为75 Kg / cm 2 以上。  高速——流速为0.1~ 10.0 ml/ min 。  高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达 100种。  高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng 。同时消耗样品 少。  HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：  速度快——通常分析一个样品在15~ 30 min，有些样品甚至 在5 min 内即可完成。  分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。  灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng ，荧光和电化学检测器 可达0.1p g 。  柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合