不同生态型芦苇叶片蛋白质双向电泳系统的筛选和优化＊技术-Core.PDF

TechniquesandMethods技术与方法 生物化学与生物物理进展 ProgressinBiochemistryandBiophysics 2008,35(10):1209~1214 不同生态型芦苇叶片蛋白质双向电泳 系统的筛选和优化* ** *** 林文芳 陈林姣 彭 浩 朱学艺 (厦门大学生命科学学院，厦门361005) 摘要 通过优化组合植物蛋白质提取方法及与之匹配的蛋白质裂解液，采用改进的OFarrel双向电泳系统，以自然生境野 ′ 生芦苇叶片为材料，筛选出一种适合纤维含量高、革质化明显的4种不同生态型芦苇(水生芦苇、轻度盐化草甸芦苇、重度 盐化草甸芦苇、沙丘芦苇)叶片蛋白质分析的双向电泳系统，即以饱和酚-醋酸铵/甲醇沉淀法提取叶片蛋白质样品，经裂解 液[8mol/L尿素，2mol/L硫脲，4%CHAPS，65mmol/LDTT，2%Ampholine(pH3.5~10∶pH5~8 1∶4)]裂解后按 80 g = ! 上样，银染后获得背景清晰、蛋白质分辨率较高的双向电泳图谱.该系统用于水稻等植物叶片蛋白质双向电泳分析，同样获 得较好的电泳图谱和分辨率. 关键词 芦苇，不同生态型，蛋白质制样，裂解液，双向电泳 学科分类号 Q946 蛋 白质 双 向 凝 胶 电 泳 (two-dimensional 植物的蛋白质制样中，例如：硫酸铵沉淀法、三氯 polyacrylamidegelelectrophoresis，2-DE)是目前唯 乙酸(TCA)沉淀法、丙酮沉淀法、TCA-丙酮沉淀 一可以从等电点和分子质量两方面将数千种蛋白质 法以及用饱和酚提取，在甲醇中以醋酸铵沉淀的方 [10～14] 同时分离与展示的技术，因而具有较高的分辨率和 法等 ，这些制样方法各有利弊，其中，又以 [10,11,14,15] 灵敏度，已成为蛋白质组学研究中的主要技术手 TCA-丙酮沉淀法应用较多 . 段.目前，已报道的双向电泳方法大多采用 蛋白质双向电泳分析中的第二个关键步骤是沉 [1] OFarrell首创或对其稍加改进的系统，该系统最 淀蛋白质的重新溶解，其中，裂解液在蛋白质样品 ′ 初主要用于动物和微生物细胞或组织的全蛋白质分 的溶解和变性中发挥着重要作用.不同的裂解液在 [1～3] 析 .近年来，随着植物蛋白质组学研究的广泛 植物蛋白质双向电泳研究中已有大量文献报 [6,7,10,14,16] 开展，OFarrell双向电泳技术及其改进方法越来越 道 ，但研究中发现，除了蛋白质制样方法 ′ [4～9] 多地应用于植物蛋白质组学的研究中 ，然而， 外，不同裂解液的组成、浓度及其配比对植物蛋白 [16] 由于植物材料，特别是适应恶劣自然生境的植物叶 质双向电泳行为和分辨率同样具有较大的影响 . 片中常含有大量色素、酚类、有机酸、脂类及其他 然而，