AT1RshRNA重组腺病毒载体在C6细胞中的功能表达及对SHR的AT1R分布的影响.pdf

山西医科大学琢士学位论文 第一章ATlRshRRA重组腺病毒载体在c6细胞中的功能表达 1．1材料与方法 1．1．1主要试剂 所用病毒载体是构建成功后由北京本元正阳公司包装鉴定扩增纯化后的生产的复制 GreenFluorescence (Enhanced 见《血管紧张素受体lshRNA载体的构建和鉴定》(未发表)俐用分子克隆技术，在体外合 载体。由于该重组载体在进入哺乳细胞胞浆之后进行表达，表达产物折叠成发夹RNA，从 DMEM高糖培养基Hyclone公司 DMEM低糖培养基Hyclone公司 D一葡萄糖 sigma公司 胎牛血清 杭州四季青公司 Trizol试剂 Invitrogen生命技术公司。 ATl一R引物及探针 上海生工 B-actingl物及探针 上海生工 焦磷酸二乙脂(DEPC) sigma公司 Taq酶Promega公司 RNasin Promega公司 M-MLVReverse transcroDtase Promega公司 Ol 5Primer igo(dT)1 Promega公司 琼脂糖 sigma公司 DNAMarker 武汉生命技术有限公司 细胞裂解液TIANGEN公司 SDS—PAGE 5×蛋白上样缓冲液TIANGEN公司 兔抗鼠ATI—R抗体 International AlphaDiagnostic CRUZ B—actin抗体 SANTABIOTECHNOLOGY’INC． 蛋白Marker TIANGEN公司 Pro—l HRP化学发光检测试剂TIANGEN公司 ight 山西医辩大学顿士学位论文 1．1．2实验对象 人胚肾细胞(293)由华中科技大学协和医院中心实验室董继华主任惠赠。 大鼠神经胶质瘤C6细胞株购自中国典型物保藏中心。 1．1．3主要仪器 超净工作台 北京仪器厂 C02恒温孵箱 美国FormaScientific公司 倒置荧光显微镜 OlympusIX71，加摄像系统 正置荧光显微镜 OlympusBX51，加摄像系统 低速离心机 北京医用离心机厂 高速冷冻离心机 Centrifuge5403，Eppendorf，Hamburg 紫外分光光度计 北京仪器厂 冰冻切片机 德国LEICAMLTRACUTUCT超薄切片机 Tecnai 透射电镜 荷兰FEI G2优化的冷冻样品分析 PCR PCR仪 美国ABI公司生产