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介入治疗对宫颈癌VEGF、WD的影响 材料与方法 and (MaterialsMethods) 1．材料 1．1病例收集 30例宫颈癌均为鳞癌，标本取自石河子大学医学院第一附属医院及肿瘤医 院从2005年1月．2007年9月宫颈癌术前间手术切除及活检的存档蜡块，术前宫 颈活检及术后病变组织均经各院病理科证实。根据FIG01995年宫颈癌分期，其临 b 床分期为I 2例，IIa期12例，IIb期16例。患者平均年龄43岁，最大年龄62 岁，最小年龄35岁。肿瘤的平均直径为3em，最大为6cm，最小为1．5cm。病 理分级：高分化6例，中分化16例，低分化8例。组织学分类全部为鳞癌。 1．2主要试剂 1) 二甲苯、无水乙醇、柠檬酸、柠檬酸三钠、甘油均为国产产品 2) 防脱片剂APES(福州迈新生物技术开发有限公司) 3) 鼠抗人血管内皮生长因子免疫组化的单克隆抗体即用型(福州迈新生物 技术开发有限公司) 4) 鼠抗人CD34免疫组化单克隆抗体，(福州迈新生物技术开发有限公司) 5) 封闭液(5m1)，(福州迈新生物技术开发有限公司) 6) 显色剂DAB，(福州迈新生物技术开发有限公司) 7) 3％柠檬酸(PH2．0) 8) 柠檬酸(C，H-O，·H10)3．09 9) 双蒸水 1．3主要仪器设备 1’)TS．12K全自动生物脱水机 2) 石蜡包埋机 3) 海尔20L冰箱 4) 石蜡切片机(L24012．1) 51 恒温水孵箱 6) 电热恒温培养箱 7) 医用微波炉 8) OLYMPUS显微镜(日本产) 9．) 电子计算机病理图像分析系统 3 介入治疗对宫颈癌VEGF、MVD的影响 10)显微摄影器材(OLYMPUS照相机) 2．方法 2．1子宫动脉灌注化疗栓塞方法 首先取单侧股动脉穿刺，在腹股沟皮肤皱折下Icm股动脉搏动最强点穿刺， 以Seldinger’s技术完成股动脉穿刺。选择4．6F的血管鞘组，并选择与其相匹配 的导管、导丝进行相应的血管置管，将2／3量的抗癌药物先行灌注，然后将剩余 1／3量加在栓塞剂中进行栓塞。栓塞物为明胶海绵碎屑。灌注药物以顺铂为主， B 与环磷酰胺组成P C方案：顺铂70-lOOmg、博来霉素30mg，环磷酰胺600 mg；5．氟尿嘧啶1000mg或丝裂霉素10mg。常规介入化疗后水化3天，术前 均行两次。介入后14天行宫颈癌根治术。 2．2组织学观察 所有宫颈癌病例均做常规HE染色，根据2000年FIGO妇科恶性肿瘤分期 标准，由高年瓷病理墨生对宫颈癌进行组织分级南 4 介入治疗对宫颈癌VEGF、wD的影响 2．3组织切片的制备： 1_)载玻片的准备普通玻璃载玻片经高锰酸钾浸泡48小时，清水冲洗，95％ 酒精浸泡，烘干后涂抹防脱片剂(APES)，晾干后备用。 2)切片于石蜡包埋组织块近肿瘤组织处行4微米连续切片后，将组织切片 铺置于己涂抹防脱片剂的载玻片上，每个标本制片三张，置58度烤箱 内烘干后备用。 2．4免疫组织化学方法(Envision法) 2．4．1免疫组织化学检测的步骤： 1)将4微米厚石蜡切片常规经二甲苯、梯度酒精脱蜡至蒸馏水。 2)在室温下将切片经3％过氧化氢孵育10分钟，以消除内源性过氧化物酶 的活性。 3)蒸馏水冲洗3遍后用TBS浸泡5分钟。 4)微波炉抗原修复：切片放入盛有柠檬酸缓冲液(0．1M．PH=6．O)的塑料容器 中，置微波炉内中火加热，水温控制于95．98度之间加热10．15分钟， 冷却至室温，后用TBS液洗涤。 u 5)擦去多余的TBS液，每张切片加50l非